बुरशीनाशक पूरकतेमुळे एकाकी मेसन मधमाश्यांमध्ये निव्वळ ऊर्जा वाढ आणि सूक्ष्मजीव विविधता कमी होते.

Nature.com ला भेट दिल्याबद्दल धन्यवाद. तुम्ही वापरत असलेल्या ब्राउझरच्या आवृत्तीला मर्यादित CSS सपोर्ट आहे. सर्वोत्तम परिणामांसाठी, आम्ही शिफारस करतो की तुम्ही तुमच्या ब्राउझरची नवीन आवृत्ती वापरा (किंवा इंटरनेट एक्सप्लोररमध्ये कंपॅटिबिलिटी मोड अक्षम करा). दरम्यान, सतत सपोर्ट सुनिश्चित करण्यासाठी, आम्ही स्टाइलिंग किंवा जावास्क्रिप्टशिवाय साइट प्रदर्शित करत आहोत.
झाडांच्या फळांच्या फुलांच्या दरम्यान बुरशीनाशकांचा वापर केला जातो आणि ते कीटकांच्या परागकणांना धोका निर्माण करू शकतात. तथापि, फुलांच्या दरम्यान सफरचंदांवर सामान्यतः वापरल्या जाणाऱ्या संपर्क आणि प्रणालीगत बुरशीनाशकांना मधमाशी नसलेले परागकण (उदा., एकट्या मधमाश्या, ओस्मिया कॉर्निफ्रॉन) कसे प्रतिसाद देतात याबद्दल फारसे माहिती नाही. हे ज्ञान अंतर सुरक्षित सांद्रता आणि बुरशीनाशक फवारणीची वेळ निश्चित करणारे नियामक निर्णय मर्यादित करते. आम्ही दोन संपर्क बुरशीनाशके (कॅप्टन आणि मॅन्कोझेब) आणि चार इंटरलेयर/फायटोसिस्टम बुरशीनाशके (सिप्रोसायक्लिन, मायक्लोब्युटानिल, पायरोस्ट्रोबिन आणि ट्रायफ्लॉक्सीस्ट्रोबिन) च्या परिणामांचे मूल्यांकन केले. अळ्यांचे वजन वाढणे, जगणे, लिंग गुणोत्तर आणि बॅक्टेरिया विविधतेवर परिणाम. मूल्यांकन एका क्रॉनिक ओरल बायोअसे वापरून केले गेले ज्यामध्ये शेतात वापरण्यासाठी सध्या शिफारस केलेल्या डोस (१X), अर्धा डोस (०.५X) आणि कमी डोस (०.१X) वर आधारित तीन डोसमध्ये परागकणांवर उपचार केले गेले. मॅन्कोझेब आणि पायरिटोसोलिनच्या सर्व डोसमुळे शरीराचे वजन आणि अळ्यांचे जगणे लक्षणीयरीत्या कमी झाले. त्यानंतर आम्ही १६S जनुकाचे अनुक्रमीकरण केले जेणेकरून मॅन्कोझेबच्या लार्व्हा बॅक्टेरियोमचे वैशिष्ट्य दिसून येईल, जो सर्वाधिक मृत्युदरासाठी जबाबदार बुरशीनाशक आहे. आम्हाला आढळले की मॅन्कोझेब-प्रक्रिया केलेल्या परागकणांवर खाल्लेल्या अळ्यांमध्ये बॅक्टेरियाची विविधता आणि विपुलता लक्षणीयरीत्या कमी झाली आहे. आमच्या प्रयोगशाळेतील निकालांवरून असे दिसून येते की फुलांच्या दरम्यान यापैकी काही बुरशीनाशकांची फवारणी करणे ओ. कॉर्निफ्रॉनच्या आरोग्यासाठी विशेषतः हानिकारक आहे. ही माहिती फळझाड संरक्षण उत्पादनांच्या शाश्वत वापराबाबत भविष्यातील व्यवस्थापन निर्णयांसाठी प्रासंगिक आहे आणि परागकणांचे संरक्षण करण्याच्या उद्देशाने नियामक प्रक्रियांसाठी आधार म्हणून काम करते.
१९७० च्या दशकाच्या उत्तरार्धात आणि १९८० च्या दशकाच्या सुरुवातीला जपानमधून अमेरिकेत एकट्या मेसन मधमाशी ओस्मिया कॉर्निफ्रॉन (हायमेनोप्टेरा: मेगाचिलिडे) ची ओळख झाली आणि तेव्हापासून या प्रजातीने व्यवस्थापित परिसंस्थांमध्ये महत्त्वाची परागकण भूमिका बजावली आहे. या मधमाशीची नैसर्गिक लोकसंख्या ही सुमारे ५० प्रजातींच्या वन्य मधमाश्यांचा भाग आहे जी युनायटेड स्टेट्समधील बदाम आणि सफरचंद बागांमध्ये परागकण करणाऱ्या मधमाश्यांना पूरक आहे. मेसन मधमाश्यांना अधिवास विखंडन, रोगजनक आणि कीटकनाशके ३,४ यासह अनेक आव्हानांना तोंड द्यावे लागते. कीटकनाशकांमध्ये, बुरशीनाशके ऊर्जा मिळवणे, चारा शोधणे ५ आणि शरीराची स्थिती ६,७ कमी करतात. जरी अलिकडच्या संशोधनातून असे दिसून आले आहे की मेसन मधमाश्यांच्या आरोग्यावर थेट कोमेन्सल आणि एक्टोबॅक्टिक सूक्ष्मजीवांचा प्रभाव पडतो, ८,९ कारण बॅक्टेरिया आणि बुरशी पोषण आणि रोगप्रतिकारक प्रतिक्रियांवर परिणाम करू शकतात, मेसन मधमाश्यांच्या सूक्ष्मजीव विविधतेवर बुरशीनाशकाच्या प्रदर्शनाचा परिणाम नुकताच अभ्यासला जाऊ लागला आहे.
सफरचंदाच्या खवल्या, कडू कुजणे, तपकिरी कुजणे आणि पावडरी बुरशी यासारख्या आजारांवर उपचार करण्यासाठी बागेत फुलांच्या आधी आणि दरम्यान विविध प्रभावांचे (संपर्क आणि पद्धतशीर) बुरशीनाशके फवारली जातात. बुरशीनाशके परागकणांसाठी निरुपद्रवी मानली जातात, म्हणून फुलांच्या काळात बागायतदारांना त्यांची शिफारस केली जाते; मधमाश्यांद्वारे या बुरशीनाशकांचा संपर्क आणि सेवन तुलनेने सुप्रसिद्ध आहे, कारण ते यूएस पर्यावरण संरक्षण एजन्सी आणि इतर अनेक राष्ट्रीय नियामक एजन्सींच्या कीटकनाशक नोंदणी प्रक्रियेचा एक भाग आहे12,13,14. तथापि, मधमाश्या नसलेल्यांवर बुरशीनाशकांचे परिणाम कमी ज्ञात आहेत कारण ते युनायटेड स्टेट्समध्ये मार्केटिंग अधिकृतता करारांतर्गत आवश्यक नाहीत15. याव्यतिरिक्त, एकट्या मधमाश्यांच्या चाचणीसाठी सामान्यतः कोणतेही प्रमाणित प्रोटोकॉल नाहीत16,17, आणि चाचणीसाठी मधमाश्यांना प्रदान करणाऱ्या वसाहती राखणे आव्हानात्मक आहे18. जंगली मधमाशांवर कीटकनाशकांच्या परिणामांचा अभ्यास करण्यासाठी युरोप आणि अमेरिकेत वेगवेगळ्या व्यवस्थापित मधमाश्यांच्या चाचण्या वाढत्या प्रमाणात घेतल्या जात आहेत आणि अलीकडेच O. cornifrons19 साठी प्रमाणित प्रोटोकॉल विकसित केले गेले आहेत.
शिंगे असलेल्या मधमाश्या मोनोसाइट्स असतात आणि मधमाशांच्या पूरक किंवा बदली म्हणून कार्प पिकांमध्ये व्यावसायिकरित्या वापरल्या जातात. या मधमाश्या मार्च ते एप्रिल दरम्यान बाहेर पडतात, अकाली नर मादीच्या तीन ते चार दिवस आधी बाहेर पडतात. मिलनानंतर, मादी सक्रियपणे परागकण आणि अमृत गोळा करते जेणेकरून नळीच्या घरट्यातील पोकळीत (नैसर्गिक किंवा कृत्रिम) ब्रूड पेशींची मालिका प्रदान केली जाईल. अंडी पेशींच्या आत परागकणांवर घातली जातात; त्यानंतर मादी पुढील पेशी तयार करण्यापूर्वी मातीची भिंत बांधते. पहिल्या इनस्टार अळ्या कोरियनमध्ये बंदिस्त असतात आणि भ्रूण द्रवपदार्थ खातात. दुसऱ्या ते पाचव्या इनस्टार (प्रीप्युपा) पर्यंत, अळ्या परागकण खातात22. परागकणांचा पुरवठा पूर्णपणे संपल्यानंतर, अळ्या कोकून तयार करतात, प्युपेट करतात आणि त्याच ब्रूड चेंबरमध्ये प्रौढ म्हणून बाहेर पडतात, सहसा उन्हाळ्याच्या शेवटी20,23. प्रौढ पुढील वसंत ऋतूमध्ये बाहेर पडतात. प्रौढांचे अस्तित्व अन्न सेवनावर आधारित निव्वळ ऊर्जा वाढीशी (वजन वाढ) संबंधित आहे. अशा प्रकारे, परागकणांची पौष्टिक गुणवत्ता, तसेच हवामान किंवा कीटकनाशकांच्या संपर्कासारखे इतर घटक जगण्याचे आणि आरोग्याचे निर्धारक आहेत24.
फुलांच्या आधी लावलेले कीटकनाशके आणि बुरशीनाशके वनस्पतींच्या रक्तवाहिन्यांच्या आत वेगवेगळ्या प्रमाणात जाऊ शकतात, ट्रान्सलेमिनरपासून (उदा., काही बुरशीनाशकांप्रमाणे पानांच्या वरच्या पृष्ठभागावरून खालच्या पृष्ठभागावर जाण्यास सक्षम) 25 पर्यंत. , जे मुळांपासून मुकुटात प्रवेश करू शकतात, ते सफरचंदाच्या फुलांच्या अमृतात प्रवेश करू शकतात26, जिथे ते प्रौढ O. कॉर्निफ्रॉन मारू शकतात27. काही कीटकनाशके परागकणांमध्ये देखील जातात, ज्यामुळे मक्याच्या अळ्यांच्या विकासावर परिणाम होतो आणि त्यांचा मृत्यू होतो19. इतर अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की काही बुरशीनाशके संबंधित प्रजाती O. लिग्नेरिया28 च्या घरट्याच्या वर्तनात लक्षणीय बदल करू शकतात. याव्यतिरिक्त, कीटकनाशकांच्या संपर्काच्या परिस्थितीचे अनुकरण करणारे प्रयोगशाळा आणि क्षेत्रीय अभ्यास (बुरशीनाशकांसह) असे दर्शविले आहे की कीटकनाशके शरीरविज्ञान 22 आकारविज्ञान 29 आणि मधमाश्या आणि काही एकाकी मधमाश्यांच्या अस्तित्वावर नकारात्मक परिणाम करतात. फुलांच्या दरम्यान उघड्या फुलांवर थेट लावलेले विविध बुरशीनाशक फवारण्या प्रौढांनी अळ्यांच्या विकासासाठी गोळा केलेले परागकण दूषित करू शकतात, ज्याचे परिणाम अभ्यासायचे आहेत30.
पचनसंस्थेतील परागकण आणि सूक्ष्मजीव समुदायांमुळे अळ्यांचा विकास प्रभावित होतो हे वाढत्या प्रमाणात ओळखले जात आहे. मधमाश्यांच्या सूक्ष्मजीवांचा शरीराचे वस्तुमान, चयापचय बदल आणि रोगजनकांना संवेदनशीलता यासारख्या घटकांवर प्रभाव पडतो. मागील अभ्यासांमध्ये एकाकी मधमाश्यांच्या सूक्ष्मजीवांवर विकासाचा टप्पा, पोषक तत्वे आणि वातावरणाचा प्रभाव तपासला गेला आहे. या अभ्यासांमध्ये एकाकी मधमाश्यांच्या प्रजातींमध्ये अळ्या आणि परागकण सूक्ष्मजीवांची रचना आणि विपुलता तसेच सर्वात सामान्य जिवाणू प्रजाती स्यूडोमोनास आणि डेल्फिया यांच्या रचना आणि विपुलतेमध्ये समानता दिसून आली. तथापि, बुरशीनाशकांना मधमाश्यांच्या आरोग्याचे रक्षण करण्याच्या धोरणांशी जोडले गेले असले तरी, थेट तोंडी संपर्काद्वारे अळ्या सूक्ष्मजीवांवर बुरशीनाशकांचे परिणाम अद्यापही अनपेक्षित आहेत.
या अभ्यासात अमेरिकेत झाडांच्या फळांवर वापरण्यासाठी नोंदणीकृत सहा सामान्यतः वापरल्या जाणाऱ्या बुरशीनाशकांच्या वास्तविक-जगातील डोसच्या परिणामांची चाचणी घेण्यात आली, ज्यामध्ये दूषित अन्नातून कॉर्न हॉर्नवर्म मॉथ अळ्यांना तोंडावाटे दिले जाणारे संपर्क आणि प्रणालीगत बुरशीनाशकांचा समावेश आहे. आम्हाला आढळले की संपर्क आणि प्रणालीगत बुरशीनाशकांमुळे मधमाशांच्या शरीराचे वजन वाढणे कमी झाले आणि मृत्युदर वाढला, ज्याचे सर्वात गंभीर परिणाम मॅन्कोझेब आणि पायरिथियोपाइडशी संबंधित आहेत. त्यानंतर आम्ही मॅन्कोझेब-प्रक्रिया केलेल्या परागकण आहारावर दिलेल्या अळ्यांच्या सूक्ष्मजीव विविधतेची तुलना नियंत्रण आहारावर दिलेल्या अळ्यांशी केली. आम्ही मृत्युदराच्या अंतर्गत संभाव्य यंत्रणा आणि एकात्मिक कीटक आणि परागकण व्यवस्थापन (IPPM)36 कार्यक्रमांसाठी परिणामांवर चर्चा करतो.
कोकूनमध्ये हिवाळ्यात घालवणारे प्रौढ ओ. कॉर्निफ्रॉन हे बिगलरविले, पेनसिल्व्हेनिया येथील फ्रूट रिसर्च सेंटरमधून मिळवले गेले आणि −3 ते 2°C (±0.3°C) तापमानात साठवले गेले. प्रयोगापूर्वी (एकूण 600 कोकून). मे 2022 मध्ये, दररोज 100 ओ. कॉर्निफ्रॉन कोकून प्लास्टिकच्या कपमध्ये (प्रति कप 50 कोकून, DI 5 सेमी × 15 सेमी लांब) हस्तांतरित केले गेले आणि कपच्या आत वाइप्स ठेवण्यात आले जेणेकरून उघडण्यास प्रोत्साहन मिळेल आणि चघळता येईल असा सब्सट्रेट मिळेल, ज्यामुळे दगडी मधमाश्यांवर ताण कमी होईल. कोकून असलेले दोन प्लास्टिक कप एका कीटकांच्या पिंजऱ्यात (30 × 30 × 30 सेमी, बगडॉर्म मेगाव्ह्यू सायन्स कंपनी लिमिटेड, तैवान) 50% सुक्रोज द्रावण असलेल्या 10 मिली फीडरसह ठेवा आणि बंद आणि मिलन सुनिश्चित करण्यासाठी चार दिवस साठवा. 23°C, सापेक्ष आर्द्रता 60%, फोटोपीरियड 10 l (कमी तीव्रता): 14 दिवस. सफरचंदाच्या फुलांच्या शिखरावर (सापळ्याचे घरटे: रुंदी ३३.६६ × उंची ३०.४८ × लांबी ४६.९९ सेमी; पूरक आकृती १) सहा दिवसांसाठी (दररोज १००) दररोज सकाळी १०० मिलन झालेल्या माद्या आणि नरांना दोन कृत्रिम घरट्यांमध्ये सोडण्यात आले. पेनसिल्व्हेनिया स्टेट अर्बोरेटम येथे, चेरीजवळ (प्रुनस सेरासस 'युबँक' स्वीट चेरी पाई™), पीच (प्रुनस पर्सिका 'कॉन्टेन्डर'), प्रुनस पर्सिका 'पीएफ 27ए' फ्लेमिन फ्युरी®), नाशपाती (पायरस पेरिफोलिया 'ऑलिंपिक', पायरस पेरिफोलिया 'शिंको', पायरस पेरिफोलिया 'शिनसेकी'), कोरोनारिया सफरचंद वृक्ष (मालस कोरोनारिया) आणि सफरचंद वृक्षांच्या असंख्य जाती (मालस कोरोनारिया, मालस), घरगुती सफरचंद वृक्ष 'को-ऑप 30′ एंटरप्राइज™, मालस सफरचंद वृक्ष 'को-ऑप 31′ वाइनक्रिस्प™, बेगोनिया 'फ्रीडम', बेगोनिया 'गोल्डन डेलिशियस', बेगोनिया 'नोव्हा स्पाय'). प्रत्येक निळ्या प्लास्टिक पक्षीगृह दोन लाकडी पेट्यांच्या वर बसते. प्रत्येक घरट्यात ८०० रिकाम्या क्राफ्ट पेपर ट्यूब (सर्पिल ओपन, ०.८ सेमी आयडी × १५ सेमी एल) (जोन्सविले पेपर ट्यूब कंपनी, मिशिगन) होत्या ज्या अपारदर्शक सेलोफेन ट्यूबमध्ये घातल्या गेल्या होत्या (०.७ ओडी पहा प्लास्टिक प्लग (T-1X प्लग) घरट्याची जागा प्रदान करतात.
दोन्ही घरटे पूर्वेकडे तोंड करून हिरव्या प्लास्टिकच्या बागेच्या कुंपणाने झाकलेले होते (एव्हरबिल्ट मॉडेल #889250EB12, उघडण्याचा आकार 5 × 5 सेमी, 0.95 मीटर × 100 मीटर) जेणेकरून उंदीर आणि पक्षी प्रवेश करू शकतील आणि घरट्याच्या मातीच्या पेट्यांजवळ मातीच्या पृष्ठभागावर ठेवले गेले. घरटे पेटी (पूरक आकृती 1a). घरट्यांमधून 30 नळ्या गोळा करून आणि प्रयोगशाळेत नेऊन दररोज कॉर्न बोअरर अंडी गोळा केली जात होती. कात्री वापरून, नळीच्या शेवटी एक कट करा, नंतर ब्रूड पेशी उघड करण्यासाठी सर्पिल नळी वेगळे करा. वक्र स्पॅटुला वापरून वैयक्तिक अंडी आणि त्यांचे परागकण काढून टाकण्यात आले (मायक्रोस्लाइड टूल किट, बायोक्विप प्रॉडक्ट्स इंक., कॅलिफोर्निया). अंडी ओल्या फिल्टर पेपरवर उबवण्यात आली आणि आमच्या प्रयोगांमध्ये वापरण्यापूर्वी 2 तास पेट्री डिशमध्ये ठेवली गेली (पूरक आकृती 1b-d).
प्रयोगशाळेत, आम्ही सफरचंद फुलण्यापूर्वी आणि फुलोऱ्यादरम्यान वापरल्या जाणाऱ्या सहा बुरशीनाशकांच्या तोंडी विषाक्ततेचे मूल्यांकन तीन सांद्रतांवर केले (०.१X, ०.५X, आणि १X, जिथे १X हे प्रति १०० गॅलन पाणी/एकर लागू केलेले चिन्ह आहे. उच्च शेतातील डोस = शेतातील एकाग्रता). , तक्ता १). प्रत्येक एकाग्रतेची १६ वेळा पुनरावृत्ती झाली (n = १६). दोन संपर्क बुरशीनाशके (टेबल S1: मॅन्कोझेब २६९६.१४ पीपीएम आणि कॅप्टन २८७५.८८ पीपीएम) आणि चार प्रणालीगत बुरशीनाशके (टेबल S1: पायरिथिओस्ट्रोबिन २५०.१४ पीपीएम; ट्रायफ्लॉक्सीस्ट्रोबिन ११०.०६ पीपीएम; मायक्लोब्युटानिल अझोल ७५ .१२ पीपीएम; सायप्रोडिनिल २८०.८४५ पीपीएम) फळे, भाज्या आणि शोभेच्या पिकांसाठी विषाक्तता. आम्ही ग्राइंडर वापरून परागकण एकरूप केले, ०.२० ग्रॅम एका विहिरीत (२४-विहिरी फाल्कन प्लेट) हलवले आणि १ मिमी खोल विहिरींमध्ये पिरॅमिडल परागकण तयार करण्यासाठी १ μL बुरशीनाशक द्रावण जोडले आणि मिसळले ज्यामध्ये अंडी ठेवली गेली. एका लहान स्पॅटुला वापरून ठेवा (पूरक आकृती १c,d). फाल्कन प्लेट्स खोलीच्या तपमानावर (२५°C) आणि ७०% सापेक्ष आर्द्रतेवर साठवल्या गेल्या. आम्ही त्यांची तुलना शुद्ध पाण्याने प्रक्रिया केलेल्या एकसंध परागकण आहारात दिलेल्या नियंत्रण अळ्यांशी केली. आम्ही मृत्युदर नोंदवला आणि अळ्या प्रीपुपल वयापर्यंत पोहोचेपर्यंत दर दुसऱ्या दिवशी अळ्यांचे वजन मोजले (फिशर सायंटिफिक, अचूकता = ०.०००१ ग्रॅम). शेवटी, २.५ महिन्यांनंतर कोकून उघडून लिंग गुणोत्तराचे मूल्यांकन केले गेले.
संपूर्ण O. कॉर्निफ्रॉन लार्वांमधून DNA काढण्यात आला (प्रति उपचार स्थिती n = 3, मॅन्कोझेब-उपचारित आणि उपचार न केलेले परागकण) आणि आम्ही या नमुन्यांवर सूक्ष्मजीव विविधता विश्लेषण केले, विशेषतः कारण मॅन्कोझेबमध्ये अळ्यांमध्ये सर्वाधिक मृत्युदर आढळून आला. MnZn प्राप्त करत आहे. DNAZymoBIOMICS®-96 MagBead DNA किट (Zymo Research, Irvine, CA) वापरून DNA वाढवला गेला, शुद्ध केला गेला आणि v3 किट वापरून Illumina® MiSeq™ वर अनुक्रमित (600 चक्र) केले गेले. 16S rRNA जनुकाच्या V3-V4 क्षेत्राला लक्ष्य करणाऱ्या प्राइमर्सचा वापर करून Quick-16S™ NGS लायब्ररी प्रेप किट (Zymo Research, Irvine, CA) वापरून बॅक्टेरिया 16S राइबोसोमल RNA जनुकांचे लक्ष्यित अनुक्रमण करण्यात आले. याव्यतिरिक्त, 10% PhiX समावेश वापरून 18S अनुक्रमण करण्यात आले आणि प्राइमर जोडी 18S001 आणि NS4 वापरून प्रवर्धन करण्यात आले.
QIIME2 पाइपलाइन (v2022.11.1) वापरून पेअर केलेले रीड39 आयात करा आणि प्रक्रिया करा. हे रीड ट्रिम केले गेले आणि विलीन केले गेले आणि QIIME2 (qiime dada2 noise pairing)40 मधील DADA2 प्लगइन वापरून काइमेरिक सीक्वेन्स काढले गेले. 16S आणि 18S क्लास असाइनमेंट ऑब्जेक्ट क्लासिफायर प्लगइन Classify-sklearn आणि प्री-ट्रेन केलेले आर्टिफॅक्ट silva-138-99-nb-classifier वापरून केले गेले.
सर्व प्रायोगिक डेटा सामान्यता (शापिरो-विल्क्स) आणि भिन्नतांच्या एकरूपतेसाठी तपासला गेला (लेव्हेनची चाचणी). डेटा सेट पॅरामीट्रिक विश्लेषणाच्या गृहीतकांना पूर्ण करत नसल्यामुळे आणि रूपांतरण अवशेषांचे प्रमाणीकरण करण्यात अयशस्वी झाल्यामुळे, आम्ही लार्व्हा ताज्या वजनावर उपचारांच्या परिणामाचे मूल्यांकन करण्यासाठी दोन घटकांसह नॉनपॅरामीट्रिक द्वि-मार्गी ANOVA (क्रस्कल-वॉलिस) केले, त्यानंतर विल्कोक्सन चाचणी वापरून पोस्टहॉक नॉनपॅरामीट्रिक जोडीवार तुलना केली गेली. तीन बुरशीनाशक सांद्रता 41,42 मध्ये जगण्यावर बुरशीनाशकांच्या प्रभावांची तुलना करण्यासाठी आम्ही पॉइसन वितरणासह सामान्यीकृत रेषीय मॉडेल (GLM) वापरला. विभेदक विपुलता विश्लेषणासाठी, अँप्लिकॉन अनुक्रम प्रकारांची (ASVs) संख्या जीनस स्तरावर कोलॅप्स केली गेली. १६S (जीनस लेव्हल) आणि १८S रिलेटिव्ह एम्बुलेंस वापरणाऱ्या गटांमधील डिफरेंशियल अॅक्सिडेंटची तुलना बीटा झिरो-इन्फ्लेटेड (BEZI) फॅमिली डिस्ट्रिब्युशनसह पोझिशन, स्केल आणि आकार (GAMLSS) साठी सामान्यीकृत अॅडिटीव्ह मॉडेल वापरून करण्यात आली, जी मायक्रोबायोम R43 (v1.1) मध्ये मॅक्रोवर मॉडेल केली गेली होती. १). डिफरेंशियल विश्लेषणापूर्वी माइटोकॉन्ड्रियल आणि क्लोरोप्लास्ट प्रजाती काढून टाका. १८S च्या वेगवेगळ्या टॅक्सोनॉमिक लेव्हलमुळे, डिफरेंशियल विश्लेषणासाठी प्रत्येक टॅक्सॉनची फक्त सर्वात कमी लेव्हल वापरली गेली. सर्व सांख्यिकीय विश्लेषणे R (v. 3.4.3., CRAN प्रोजेक्ट) (टीम २०१३) वापरून करण्यात आली.
मॅन्कोझेब, पायरिथिओस्ट्रोबिन आणि ट्रायफ्लॉक्सीस्ट्रोबिनच्या संपर्कात आल्याने ओ. कॉर्निफ्रॉनमध्ये शरीराचे वजन लक्षणीयरीत्या कमी झाले (आकृती १). मूल्यांकन केलेल्या तिन्ही डोससाठी हे परिणाम सातत्याने दिसून आले (आकृती १अ-क). सायक्लोस्ट्रोबिन आणि मायक्लोब्युटानिलने अळ्यांचे वजन लक्षणीयरीत्या कमी केले नाही.
चार आहार उपचारांअंतर्गत तीन वेळेच्या टप्प्यांवर स्टेम बोअरर अळ्यांचे सरासरी ताजे वजन मोजले जाते (एकसंध परागकण खाद्य + बुरशीनाशक: नियंत्रण, 0.1X, 0.5X आणि 1X डोस). (अ) कमी डोस (0.1X): पहिला वेळ बिंदू (दिवस 1): χ2: 30.99, DF = 6; P < 0.0001, दुसरा वेळ बिंदू (दिवस 5): 22.83, DF = 0.0009; तिसरा वेळ; पॉइंट (दिवस 8): χ2: 28.39, DF = 6; (ब) अर्धा डोस (0.5X): पहिला वेळ बिंदू (दिवस 1): χ2: 35.67, DF = 6; P < 0.0001, दुसरा वेळ बिंदू (दिवस 1). ): χ2: 15.98, DF = 6; P = 0.0090; तिसरा वेळ बिंदू (दिवस ८) χ२: १६.४७, DF = ६; (c) साइट किंवा पूर्ण डोस (१X): पहिला वेळ बिंदू (दिवस १) χ२: २०.६४, P = ६; P = ०.०३२६, दुसरा वेळ बिंदू (दिवस ५): χ२: २२.८३, DF = ६; P = ०.०००९; तिसरा वेळ बिंदू (दिवस ८): χ२: २८.३९, DF = ६; भिन्नतेचे नॉनपॅरामेट्रिक विश्लेषण. बार जोडीनिहाय तुलनांचे सरासरी ± SE दर्शवतात (α = ०.०५) (n = १६) *P ≤ ०.०५, **P ≤ ०.००१, ***P ≤ ०.०००१.
सर्वात कमी डोस (०.१X) घेतल्यास, ट्रायफ्लॉक्सीस्ट्रोबिनने अळ्यांचे शरीराचे वजन ६०%, मॅन्कोझेबने ४९%, मायक्लोब्युटानिलने ४८% आणि पायरिथिस्ट्रोबिनने ४६% कमी झाले (आकृती १अ). अर्ध्या फील्ड डोस (०.५X) च्या संपर्कात आल्यावर, मॅन्कोझेब अळ्यांचे शरीराचे वजन ८६%, पायरिथिओस्ट्रोबिनने ५२% आणि ट्रायफ्लॉक्सीस्ट्रोबिनने ५०% कमी झाले (आकृती १ब). मॅन्कोझेबच्या पूर्ण फील्ड डोस (१X) ने अळ्यांचे वजन ८२%, पायरिथिओस्ट्रोबिनने ७०% आणि ट्रायफ्लॉक्सीस्ट्रोबिन, मायक्लोब्युटानिल आणि सॅन्गार्डने अंदाजे ३०% कमी केले (आकृती १क).
मॅन्कोझेब-उपचारित परागकण खाल्लेल्या अळ्यांमध्ये मृत्युदर सर्वाधिक होता, त्यानंतर पायरिथियोस्ट्रोबिन आणि ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिनचा क्रमांक लागतो. मॅन्कोझेब आणि पायरिटिसोलिनच्या वाढत्या डोससह मृत्युदर वाढला (आकृती २; तक्ता २). तथापि, ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिनच्या सांद्रतेत वाढ झाल्यामुळे कॉर्न बोअरर मृत्युदरात किंचित वाढ झाली; नियंत्रण उपचारांच्या तुलनेत सायप्रोडिनिल आणि कॅप्टनने मृत्युदरात लक्षणीय वाढ केली नाही.
सहा वेगवेगळ्या बुरशीनाशकांनी वैयक्तिकरित्या उपचार केलेल्या परागकणांच्या सेवनानंतर बोअरर माशीच्या अळ्यांच्या मृत्युदराची तुलना करण्यात आली. मक्याच्या किड्यांच्या तोंडी संपर्कासाठी मॅन्कोझेब आणि पेंटोपायरामाइड अधिक संवेदनशील होते (GLM: χ = 29.45, DF = 20, P = 0.0059) (रेषा, उतार = 0.29, P < 0.001; उतार = 0.24, P < 0.00)).
सरासरी, सर्व उपचारांमध्ये, ३९.०५% रुग्ण महिला आणि ६०.९५% पुरुष होते. नियंत्रण उपचारांमध्ये, कमी-डोस (०.१X) आणि अर्ध-डोस (०.५X) अभ्यासांमध्ये महिलांचे प्रमाण ४०% होते आणि फील्ड-डोस (१X) अभ्यासांमध्ये ३०% होते. ०.१X डोसमध्ये, मॅन्कोझेब आणि मायक्लोब्युटानिलने उपचार केलेल्या परागकणांनी भरलेल्या अळ्यांमध्ये, ३३.३३% प्रौढ मादी होत्या, २२% प्रौढ मादी होत्या, ४४% प्रौढ अळ्या मादी होत्या, ४४% प्रौढ अळ्या मादी होत्या. मादी होत्या, ४१% प्रौढ अळ्या मादी होत्या आणि नियंत्रणे ३१% होती (आकृती ३अ). ०.५ पट डोस घेतल्यास, मॅन्कोझेब आणि पायरिथिओस्ट्रोबिन गटातील प्रौढ जंतांपैकी ३३% महिला, ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिन गटात ३६%, मायक्लोब्युटानिल गटात ४१% आणि सायप्रोस्ट्रोबिन गटात ४६% महिला होत्या. कॅप्टन गटात ही संख्या ५३% आणि नियंत्रण गटात ३८% होती (आकृती ३ब). १X डोस घेतल्यास, मॅन्कोझेब गटातील ३०% महिला, पायरिथिओस्ट्रोबिन गटातील ३६%, ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिन गटातील ४४%, मायक्लोब्युटानिल गटातील ३८%, नियंत्रण गटातील ५०% महिला होत्या - ३८.५% (आकृती ३क).
लार्व्हा स्टेज बुरशीनाशकाच्या संपर्कानंतर मादी आणि नर बोअरर्सची टक्केवारी. (अ) कमी डोस (०.१X). (ब) अर्धा डोस (०.५X). (क) शेतातील डोस किंवा पूर्ण डोस (१X).
१६S अनुक्रम विश्लेषणातून असे दिसून आले की मॅन्कोझेब-प्रक्रिया केलेल्या परागकणांनी भरलेल्या अळ्या आणि उपचार न केलेल्या परागकणांनी भरलेल्या अळ्या यांच्यात बॅक्टेरिया गटात फरक होता (आकृती ४अ). परागकणांनी भरलेल्या उपचार न केलेल्या अळ्यांचा सूक्ष्मजीव निर्देशांक मॅन्कोझेब-प्रक्रिया केलेल्या परागकणांनी भरलेल्या अळ्यांपेक्षा जास्त होता (आकृती ४ब). गटांमधील समृद्धतेमध्ये आढळलेला फरक सांख्यिकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण नसला तरी, तो उपचार न केलेल्या परागकणांवर खाणाऱ्या अळ्यांपेक्षा लक्षणीयरीत्या कमी होता (आकृती ४क). सापेक्ष विपुलतेवरून असे दिसून आले की नियंत्रण परागकणांवर भरलेल्या अळ्यांचा सूक्ष्मजीव मॅन्कोझेब-प्रक्रिया केलेल्या अळ्यांपेक्षा अधिक वैविध्यपूर्ण होता (आकृती ५अ). वर्णनात्मक विश्लेषणातून नियंत्रण आणि मॅन्कोझेब-प्रक्रिया केलेल्या नमुन्यांमध्ये २८ प्रजातींची उपस्थिती दिसून आली (आकृती ५ब). c १८S अनुक्रम वापरून केलेल्या विश्लेषणातून कोणतेही महत्त्वपूर्ण फरक दिसून आले नाहीत (पूरक आकृती २).
१६S अनुक्रमांवर आधारित SAV प्रोफाइलची तुलना शॅनन समृद्धीशी केली गेली आणि फिलम स्तरावर निरीक्षण केलेली समृद्धी दर्शविली गेली. (अ) उपचार न केलेल्या परागकण-पोषित किंवा नियंत्रण (निळा) आणि मॅन्कोझेब-पोषित अळ्या (नारंगी) मध्ये एकूण सूक्ष्मजीव समुदाय संरचनेवर आधारित प्रमुख समन्वय विश्लेषण (PCoA). प्रत्येक डेटा पॉइंट एक वेगळा नमुना दर्शवितो. मल्टीव्हेरिएट टी वितरणाच्या ब्रे-कर्टिस अंतराचा वापर करून PCoA ची गणना केली गेली. अंडाकृती ८०% आत्मविश्वास पातळी दर्शवितात. (ब) बॉक्सप्लॉट, कच्चा शॅनन संपत्ती डेटा (बिंदू) आणि क. निरीक्षणीय संपत्ती. बॉक्सप्लॉट मध्य रेषा, इंटरक्वार्टाइल श्रेणी (IQR) आणि १.५ × IQR (n = ३) साठी बॉक्स दर्शवितात.
मॅन्कोझेब-प्रक्रिया केलेल्या आणि प्रक्रिया न केलेल्या परागकणांवर खाल्लेल्या अळ्यांच्या सूक्ष्मजीव समुदायांची रचना. (अ) अळ्यांमध्ये सूक्ष्मजीव प्रजातींचे सापेक्ष विपुलता वाचते. (ब) ओळखल्या जाणाऱ्या सूक्ष्मजीव समुदायांचा उष्णता नकाशा. डेल्फिया (विषमता प्रमाण (OR) = 0.67, P = 0.0030) आणि स्यूडोमोनास (OR = 0.3, P = 0.0074), मायक्रोबॅक्टेरियम (OR = 0.75, P = 0.0617) (OR = 1.5, P = 0.0060); सहसंबंध अंतर आणि सरासरी कनेक्टिव्हिटी वापरून उष्णता नकाशाच्या पंक्ती क्लस्टर केल्या जातात.
आमच्या निकालांवरून असे दिसून आले आहे की फुलांच्या दरम्यान मोठ्या प्रमाणात वापरल्या जाणाऱ्या संपर्क (मँकोझेब) आणि सिस्टेमिक (पायरोस्ट्रोबिन आणि ट्रायफ्लॉक्सीस्ट्रोबिन) बुरशीनाशकांच्या तोंडी संपर्कामुळे मक्याच्या अळ्यांचे वजन वाढणे आणि मृत्युदर लक्षणीयरीत्या कमी झाला. याव्यतिरिक्त, मॅन्कोझेबने प्रीपुपल टप्प्यात सूक्ष्मजीवांची विविधता आणि समृद्धता लक्षणीयरीत्या कमी केली. मायक्लोब्युटानिल, आणखी एक सिस्टेमिक बुरशीनाशक, तिन्ही डोसमध्ये अळ्यांच्या शरीराचे वजन लक्षणीयरीत्या कमी केले. हा परिणाम दुसऱ्या (दिवस ५) आणि तिसऱ्या (दिवस ८) वेळेच्या बिंदूंवर स्पष्ट झाला. याउलट, सायप्रोडिनिल आणि कॅप्टनने नियंत्रण गटाच्या तुलनेत वजन वाढणे किंवा जगणे लक्षणीयरीत्या कमी केले नाही. आमच्या माहितीनुसार, हे काम परागकणांच्या थेट संपर्काद्वारे कॉर्न पिकांचे संरक्षण करण्यासाठी वापरल्या जाणाऱ्या वेगवेगळ्या बुरशीनाशकांच्या क्षेत्रीय दरांचे परिणाम निश्चित करणारे पहिले काम आहे.
नियंत्रण उपचारांच्या तुलनेत सर्व बुरशीनाशक उपचारांमुळे शरीराचे वजन लक्षणीयरीत्या कमी झाले. मॅन्कोझेबचा अळ्यांच्या शरीराचे वजन वाढण्यावर सर्वाधिक परिणाम झाला, सरासरी 51% घट झाली, त्यानंतर पायरिथिओस्ट्रोबिनचा क्रमांक लागतो. तथापि, इतर अभ्यासांमध्ये बुरशीनाशकांच्या फील्ड डोसचे अळ्यांच्या टप्प्यांवर प्रतिकूल परिणाम नोंदवले गेले नाहीत44. जरी डायथिओकार्बामेट बायोसाइड्समध्ये कमी तीव्र विषारीपणा असल्याचे दिसून आले आहे45, मॅन्कोझेब सारख्या इथिलीन बिस्डिथिओकार्बामेट्स (EBDCS) युरिया इथिलीन सल्फाइडमध्ये विघटन करू शकतात. इतर प्राण्यांमध्ये त्याचे म्युटेजेनिक प्रभाव पाहता, हे क्षय उत्पादन निरीक्षण केलेल्या परिणामांसाठी जबाबदार असू शकते46,47. मागील अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की इथिलीन थायोरियाची निर्मिती वाढलेले तापमान48, आर्द्रता पातळी49 आणि उत्पादन साठवणुकीची लांबी50 यासारख्या घटकांमुळे प्रभावित होते. बायोसाइड्ससाठी योग्य साठवणुकीची परिस्थिती या दुष्परिणामांना कमी करू शकते. याव्यतिरिक्त, युरोपियन अन्न सुरक्षा प्राधिकरणाने पायरिथिओपाइडच्या विषारीपणाबद्दल चिंता व्यक्त केली आहे, जी इतर प्राण्यांच्या पचनसंस्थेसाठी कर्करोगजन्य असल्याचे दिसून आले आहे51.
मॅन्कोझेब, पायरिथिओस्ट्रोबिन आणि ट्रायफ्लॉक्सीस्ट्रोबिनच्या तोंडावाटे सेवनाने कॉर्न बोअरर अळ्यांचा मृत्युदर वाढतो. याउलट, मायक्लोब्युटानिल, सिप्रोसायक्लिन आणि कॅप्टनचा मृत्युदरावर कोणताही परिणाम झाला नाही. हे निकाल लाडर्नर एट अल.52 च्या निकालांपेक्षा वेगळे आहेत, ज्यांनी दाखवून दिले की कॅप्टनने प्रौढ ओ. लिग्नेरिया आणि एपिस मेलिफेरा एल. (हायमेनोप्टेरा, एपिसिडे) यांचे अस्तित्व लक्षणीयरीत्या कमी केले. याव्यतिरिक्त, कॅप्टन आणि बॉस्कॅलिड सारख्या बुरशीनाशकांमुळे अळ्यांचा मृत्यूदर52,53,54 किंवा आहार देण्याच्या वर्तनात बदल होतो55 असे आढळून आले आहे. हे बदल, परागकणांच्या पौष्टिक गुणवत्तेवर आणि शेवटी अळ्यांच्या अवस्थेच्या ऊर्जा वाढीवर परिणाम करू शकतात. नियंत्रण गटात आढळलेली मृत्युदर इतर अभ्यासांशी सुसंगत होती 56,57.
आमच्या कामात आढळून आलेले नर-प्रिय लिंग गुणोत्तर फुलांच्या दरम्यान अपुरे वीण आणि खराब हवामान यासारख्या घटकांद्वारे स्पष्ट केले जाऊ शकते, जसे की पूर्वी व्हिसन्स आणि बॉश यांनी ओ. कॉर्नुटा साठी सुचवले होते. जरी आमच्या अभ्यासात मादी आणि नरांना वीण होण्यासाठी चार दिवस होते (सर्वसाधारणपणे यशस्वी वीणासाठी पुरेसा कालावधी मानला जातो), तरी आम्ही ताण कमी करण्यासाठी मुद्दाम प्रकाशाची तीव्रता कमी केली. तथापि, हा बदल अनावधानाने वीण प्रक्रियेत व्यत्यय आणू शकतो61. याव्यतिरिक्त, मधमाश्यांना अनेक दिवस प्रतिकूल हवामानाचा सामना करावा लागतो, ज्यामध्ये पाऊस आणि कमी तापमान (<5°C) समाविष्ट आहे, जे वीण यशावर देखील नकारात्मक परिणाम करू शकते4,23.
जरी आमचा अभ्यास संपूर्ण लार्व्हल मायक्रोबायोमवर केंद्रित असला तरी, आमचे निकाल मधमाशांच्या पोषणासाठी आणि बुरशीनाशकाच्या संपर्कासाठी महत्त्वपूर्ण असलेल्या बॅक्टेरिया समुदायांमधील संभाव्य संबंधांबद्दल अंतर्दृष्टी प्रदान करतात. उदाहरणार्थ, अळ्यांनी मॅन्कोझेब-प्रक्रिया केलेले परागकण खाल्ल्याने अळ्यांनी उपचार न केलेल्या परागकणांच्या तुलनेत सूक्ष्मजीव समुदायाची रचना आणि विपुलता लक्षणीयरीत्या कमी केली. उपचार न केलेल्या परागकणांचे सेवन करणाऱ्या अळ्यांमध्ये, प्रोटीओबॅक्टेरिया आणि अ‍ॅक्टिनोबॅक्टेरिया हे जिवाणू गट प्रबळ होते आणि ते प्रामुख्याने एरोबिक किंवा फॅकल्टेटिव्हली एरोबिक होते. डेल्फ्ट बॅक्टेरिया, जे सहसा एकाकी मधमाशी प्रजातींशी संबंधित असतात, त्यांच्यामध्ये प्रतिजैविक क्रियाकलाप असल्याचे ज्ञात आहे, जे रोगजनकांविरुद्ध संभाव्य संरक्षणात्मक भूमिका दर्शवते. आणखी एक जिवाणू प्रजाती, स्यूडोमोनास, उपचार न केलेल्या परागकणांना दिलेल्या अळ्यांमध्ये मुबलक प्रमाणात होती, परंतु मॅन्कोझेब-प्रक्रिया केलेल्या अळ्यांमध्ये ती लक्षणीयरीत्या कमी झाली. आमचे निकाल स्यूडोमोनासला ओ. बायकोर्निस35 आणि इतर एकाकी वॅस्प्स34 मधील सर्वात मुबलक प्रजातींपैकी एक म्हणून ओळखणाऱ्या मागील अभ्यासांना समर्थन देतात. जरी O. कॉर्निफ्रॉनच्या आरोग्यात स्यूडोमोनासच्या भूमिकेसाठी प्रायोगिक पुराव्यांचा अभ्यास केला गेला नाही, तरी हे जीवाणू पेडेरस फ्यूसिपेस बीटलमध्ये संरक्षणात्मक विषारी पदार्थांचे संश्लेषण करण्यास आणि आर्जिनिन चयापचय करण्यास प्रोत्साहन देते असे दर्शविले गेले आहे. 35, 65 मध्ये. हे निरीक्षण O. कॉर्निफ्रॉनच्या अळ्यांच्या विकासाच्या काळात विषाणू आणि जीवाणूंच्या संरक्षणात संभाव्य भूमिका दर्शवितात. आमच्या अभ्यासात ओळखला जाणारा मायक्रोबॅक्टेरियम हा आणखी एक वंश आहे जो उपासमारीच्या परिस्थितीत काळ्या सैनिक माशीच्या अळ्यांमध्ये जास्त संख्येने उपस्थित असल्याचे नोंदवले गेले आहे. O. कॉर्निफ्रॉनच्या अळ्यांमध्ये, सूक्ष्मजीव तणावाच्या परिस्थितीत आतड्याच्या मायक्रोबायोमच्या संतुलन आणि लवचिकतेमध्ये योगदान देऊ शकतात. याव्यतिरिक्त, रोडोकोकस O. कॉर्निफ्रॉनच्या अळ्यांमध्ये आढळतो आणि त्याच्या डिटॉक्सिफिकेशन क्षमतेसाठी ओळखला जातो. हा वंश A. फ्लोरियाच्या आतड्यात देखील आढळतो, परंतु खूप कमी प्रमाणात आहे. आमचे निकाल असंख्य सूक्ष्मजीव टॅक्सामध्ये अनेक अनुवांशिक भिन्नतांची उपस्थिती दर्शवितात जे अळ्यांमध्ये चयापचय प्रक्रिया बदलू शकतात. तथापि, ओ. कॉर्निफ्रॉनच्या कार्यात्मक विविधतेची चांगली समज आवश्यक आहे.
थोडक्यात, निकालांवरून असे दिसून येते की मॅन्कोझेब, पायरिथिओस्ट्रोबिन आणि ट्रायफ्लॉक्सीस्ट्रोबिनमुळे शरीराचे वजन वाढले आणि कॉर्न बोअर अळ्यांचा मृत्यूदर वाढला. परागकणांवर बुरशीनाशकांच्या परिणामांबद्दल चिंता वाढत असली तरी, या संयुगांच्या अवशिष्ट चयापचयांचे परिणाम अधिक चांगल्या प्रकारे समजून घेण्याची आवश्यकता आहे. हे निकाल एकात्मिक परागकण व्यवस्थापन कार्यक्रमांच्या शिफारसींमध्ये समाविष्ट केले जाऊ शकतात जे शेतकऱ्यांना फळझाडांच्या फुलांच्या आधी आणि दरम्यान काही बुरशीनाशकांचा वापर टाळण्यास मदत करतात, बुरशीनाशके निवडून आणि वापराच्या वेळेत बदल करून किंवा कमी हानिकारक पर्यायांचा वापर करण्यास प्रोत्साहन देऊन 36. कीटकनाशकांच्या वापरावरील शिफारसी विकसित करण्यासाठी ही माहिती महत्त्वाची आहे, जसे की विद्यमान स्प्रे प्रोग्राम समायोजित करणे आणि बुरशीनाशके निवडताना फवारणीची वेळ बदलणे किंवा कमी धोकादायक पर्यायांचा वापर करण्यास प्रोत्साहन देणे. बुरशीनाशकांचे लिंग गुणोत्तर, आहार वर्तन, आतड्यातील मायक्रोबायोम आणि कॉर्न बोअर वजन कमी होणे आणि मृत्युदर या अंतर्गत असलेल्या आण्विक यंत्रणेवर होणारे प्रतिकूल परिणाम याबद्दल अधिक संशोधन आवश्यक आहे.
आकृती १ आणि २ मधील स्रोत डेटा १, २ आणि ३ हे फिगशेअर डेटा रिपॉझिटरी DOI मध्ये जमा केले आहेत: https://doi.org/10.6084/m9.figshare.24996245 आणि https://doi.org/10.6084/m9. figshare.24996233. सध्याच्या अभ्यासात (आकृती ४, ५) विश्लेषण केलेले अनुक्रम NCBI SRA रिपॉझिटरीमध्ये अॅक्सेसन क्रमांक PRJNA1023565 अंतर्गत उपलब्ध आहेत.
बॉश, जे. आणि केम्प, डब्ल्यूपी कृषी पिकांचे परागकण म्हणून मधमाश्यांच्या प्रजातींचा विकास आणि स्थापना: ओस्मिया वंशाचे उदाहरण. (हायमेनोप्टेरा: मेगाचिलिडे) आणि फळझाडे. बैल. न्तोमोर. संसाधन. 92, 3–16 (2002).
पार्कर, एमजी आणि इतर. न्यू यॉर्क आणि पेनसिल्व्हेनियामधील सफरचंद उत्पादकांमध्ये परागीकरण पद्धती आणि पर्यायी परागकणांच्या धारणा. अपडेट. शेती. अन्न प्रणाली. ३५, १–१४ (२०२०).
कोच आय., लोन्सडॉर्फ ईडब्ल्यू, आर्ट्झ डीआर, पिट्स-सिंगर टीएल आणि रिकेट्स टीएच. स्थानिक मधमाश्यांचा वापर करून बदाम परागीकरणाचे पर्यावरणशास्त्र आणि अर्थशास्त्र. जे. इकॉनॉमिक्स. एनटोमोर. १११, १६–२५ (२०१८).
ली, ई., हे, वाय., आणि पार्क, वाय.-एल. ट्रॅगोपॅन फेनोलॉजीवर हवामान बदलाचे परिणाम: लोकसंख्या व्यवस्थापनासाठी परिणाम. चढाई. बदल १५०, ३०५–३१७ (२०१८).
आर्ट्झ, डीआर आणि पिट्स-सिंगर, टीएल दोन व्यवस्थापित एकट्या मधमाश्यांच्या (ओस्मिया लिग्नारिया आणि मेगाचाइल रोटुंडाटा) घरट्याच्या वर्तनावर बुरशीनाशक आणि सहायक फवारण्यांचा परिणाम. प्लॉस वन १०, e०१३५६८८ (२०१५).
ब्यूवेस, एस. आणि इतर. कमी विषारी पीक बुरशीनाशक (फेनबुकोनाझोल) नर प्रजनन गुणवत्तेच्या सिग्नलमध्ये व्यत्यय आणते ज्यामुळे वन्य एकट्या मधमाशांमध्ये वीण यश कमी होते. जे. अॅप्स. इकोलॉजी. ५९, १५९६–१६०७ (२०२२).
स्गोलास्ट्रा एफ. आणि इतर. निओनिकोटिनॉइड कीटकनाशके आणि एर्गोस्टेरॉल बायोसिंथेसिस तीन मधमाश्यांच्या प्रजातींमध्ये सहक्रियात्मक बुरशीनाशक मृत्युदर रोखतात. कीटक नियंत्रण. विज्ञान. ७३, १२३६–१२४३ (२०१७).
कुहनेमन जेजी, गिलुंग जे, व्हॅन डायक एमटी, फोर्डिस आरएफ. आणि डॅनफोर्थ बीएन सॉलिटरी वास्प लार्वा स्टेम-नेस्टिंग मधमाश्यांना परागकणांद्वारे पुरवल्या जाणाऱ्या जिवाणू विविधतेत बदल करतात. ओस्मिया कॉर्निफ्रॉन (मेगाचिलीडे). फ्रंट. सूक्ष्मजीव. १३, १०५७६२६ (२०२३).
धरमपाल पीएस, डॅनफोर्थ बीएन आणि स्टेफन एसए आंबलेल्या परागकणांमधील एक्टोसिम्बायोटिक सूक्ष्मजीव हे परागकणाइतकेच एकट्या मधमाश्यांच्या विकासासाठी महत्त्वाचे आहेत. पारिस्थितिकी. उत्क्रांती. १२. e8788 (२०२२).
केल्डेरर एम, मॅनिसी एलएम, कॅपुटो एफ आणि थॅलहेमर एम. पुनर्बीज रोगांवर नियंत्रण ठेवण्यासाठी सफरचंद बागांमध्ये आंतर-पंक्ती लागवड: सूक्ष्मजीव निर्देशकांवर आधारित व्यावहारिक परिणामकारकता अभ्यास. वनस्पती माती 357, 381–393 (2012).
मार्टिन पीएल, क्रावचिक टी., खोदादादी एफ., अचिमोविच एसजी आणि पीटर केए मध्य-अटलांटिक युनायटेड स्टेट्समध्ये सफरचंदांचा कडू कुजणे: कारक प्रजातींचे मूल्यांकन आणि प्रादेशिक हवामान परिस्थिती आणि जातींच्या संवेदनशीलतेचा प्रभाव. फायटोपॅथॉलॉजी 111, 966–981 (2021).
कलेन एमजी, थॉम्पसन एलजे, कॅरोलन जेके, स्टाउट जेके. आणि स्टॅनली डीए बुरशीनाशके, तणनाशके आणि मधमाश्या: विद्यमान संशोधन आणि पद्धतींचा एक पद्धतशीर आढावा. पीएलओएस वन १४, ई०२२५७४३ (२०१९).
पिलिंग, ईडी आणि जेप्सन, पीसी. मधमाश्यांवर ईबीआय बुरशीनाशके आणि पायरेथ्रॉइड कीटकनाशकांचे सिनर्जिस्टिक परिणाम (एपिस मेलीफेरा). कीटक विज्ञान. 39, 293–297 (1993).
मुसेन, ईसी, लोपेझ, जेई आणि पेंग, सीवाय मधमाशीच्या अळ्या एपिस मेलीफेरा एल. (हायमेनोप्टेरा: एपिडे) च्या वाढीवर आणि विकासावर निवडक बुरशीनाशकांचा परिणाम. बुधवार. न्तोमोर. ३३, ११५१-११५४ (२००४).
व्हॅन डाइक, एम., मुलेन, ई., विक्स्टीड, डी., आणि मॅकआर्ट, एस. वृक्ष बागांमध्ये परागकणांचे संरक्षण करण्यासाठी कीटकनाशकांच्या वापरासाठी निर्णय मार्गदर्शक (कॉर्नेल विद्यापीठ, २०१८).
इवासाकी, जेएम आणि होगेंडूर्न, के. मधमाशांचे कीटकनाशकांशिवायच्या संपर्कात येणे: पद्धतींचा आढावा आणि अहवालित निकाल. शेती. परिसंस्था. बुधवार. ३१४, १०७४२३ (२०२१).
कोपिट एएम, क्लिंगर ई, कॉक्स-फोस्टर डीएल, रामिरेझ आरए. आणि पिट्स-सिंगर टीएल. ओस्मिया लिग्नेरिया (हायमेनोप्टेरा: मेगाचिलिडे) च्या अळ्या विकासावर पुरवठ्याच्या प्रकाराचा आणि कीटकनाशकांच्या प्रदर्शनाचा परिणाम. बुधवार. न्तोमोर. ५१, २४०–२५१ (२०२२).
कोपिट एएम आणि पिट्स-सिंगर टीएल एकट्या रिकाम्या घरट्यातील मधमाश्यांना कीटकनाशकांच्या संपर्काचे मार्ग. बुधवार. एनटोमोर. ४७, ४९९–५१० (२०१८).
पॅन, एनटी आणि इतर. प्रौढ जपानी बागेतल्या मधमाशांमध्ये कीटकनाशकांच्या विषारीपणाचे मूल्यांकन करण्यासाठी एक नवीन अंतर्ग्रहण बायोअसे प्रोटोकॉल (ओस्मिया कॉर्निफ्रॉन). विज्ञान. अहवाल १०, ९५१७ (२०२०).