बुरशीनाशक पुरवणीमुळे निव्वळ ऊर्जेचा लाभ कमी होतो आणि एकाकी गवंडी मधमाशांमध्ये मायक्रोबायोम विविधता कमी होते.

Nature.com ला भेट दिल्याबद्दल धन्यवाद.तुम्ही वापरत असलेल्या ब्राउझरच्या आवृत्तीमध्ये मर्यादित CSS सपोर्ट आहे.सर्वोत्तम परिणामांसाठी, आम्ही शिफारस करतो की तुम्ही तुमच्या ब्राउझरची नवीन आवृत्ती वापरा (किंवा इंटरनेट एक्सप्लोररमध्ये सुसंगतता मोड अक्षम करा).दरम्यान, चालू असलेल्या समर्थनाची खात्री करण्यासाठी, आम्ही स्टाईल किंवा JavaScript शिवाय साइट प्रदर्शित करत आहोत.
बुरशीनाशके बहुतेकदा झाडाच्या फळांच्या फुलांच्या दरम्यान वापरली जातात आणि कीटक परागकणांना धोका देऊ शकतात.तथापि, मधमाशी नसलेले परागकण (उदा., एकाकी मधमाश्या, ऑस्मिया कॉर्निफ्रॉन्स) फुलांच्या दरम्यान सफरचंदांवर सामान्यतः वापरल्या जाणाऱ्या संपर्क आणि पद्धतशीर बुरशीनाशकांना कसा प्रतिसाद देतात याबद्दल फारसे माहिती नाही.हे ज्ञान अंतर सुरक्षित एकाग्रता आणि बुरशीनाशक फवारणीची वेळ ठरवणारे नियामक निर्णय मर्यादित करते.आम्ही दोन संपर्क बुरशीनाशके (कॅप्टन आणि मॅन्कोझेब) आणि चार इंटरलेयर/फायटोसिस्टम बुरशीनाशके (सिप्रोसायक्लिन, मायक्लोब्युटॅनिल, पायरोस्ट्रोबिन आणि ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिन) च्या परिणामांचे मूल्यांकन केले.लार्व्हाचे वजन वाढणे, टिकून राहणे, लिंग गुणोत्तर आणि जिवाणू विविधता यावर परिणाम होतो.क्रॉनिक ओरल बायोअसे वापरून मूल्यांकन केले गेले ज्यामध्ये फील्ड वापर (1X), अर्धा डोस (0.5X) आणि कमी डोस (0.1X) साठी सध्या शिफारस केलेल्या डोसवर आधारित तीन डोसमध्ये परागकणांवर उपचार केले गेले.मॅन्कोझेब आणि पायरिटिसॉलीनच्या सर्व डोसमुळे शरीराचे वजन आणि लार्व्हाचे अस्तित्व लक्षणीयरीत्या कमी झाले.त्यानंतर आम्ही मॅन्कोझेबच्या लार्व्हा बॅक्टेरियोमचे वैशिष्ट्य करण्यासाठी 16S जनुकाचा क्रम लावला, जो सर्वाधिक मृत्यूसाठी जबाबदार बुरशीनाशक आहे.आम्हाला आढळले की मॅन्कोझेब-उपचार केलेल्या परागकणांवर खाल्लेल्या अळ्यांमध्ये बॅक्टेरियाची विविधता आणि विपुलता लक्षणीयरीत्या कमी झाली आहे.आमचे प्रयोगशाळेचे परिणाम असे सूचित करतात की फुलांच्या दरम्यान यापैकी काही बुरशीनाशकांची फवारणी O. कॉर्निफ्रॉनच्या आरोग्यासाठी विशेषतः हानिकारक आहे.ही माहिती फळ वृक्ष संरक्षण उत्पादनांच्या शाश्वत वापरासंबंधी भविष्यातील व्यवस्थापन निर्णयांसाठी उपयुक्त आहे आणि परागकणांचे संरक्षण करण्याच्या उद्देशाने नियामक प्रक्रियेसाठी आधार म्हणून काम करते.
1970 च्या दशकाच्या उत्तरार्धात आणि 1980 च्या दशकाच्या सुरुवातीस जपानमधून ऑस्मिया कॉर्निफ्रन्स (हायमेनॉप्टेरा: मेगाचिलिडे) ही एकांती मेसन मधमाशी युनायटेड स्टेट्समध्ये आणली गेली आणि तेव्हापासून या प्रजातींनी व्यवस्थापित परिसंस्थांमध्ये महत्त्वपूर्ण परागकण भूमिका बजावली आहे.या मधमाशीची नैसर्गिक लोकसंख्या ही युनायटेड स्टेट्समधील बदाम आणि सफरचंद बागांचे परागीकरण करणाऱ्या मधमाशांना पूरक असलेल्या जंगली मधमाशांच्या अंदाजे 50 प्रजातींचा भाग आहे.मेसन मधमाशांना अनेक आव्हानांचा सामना करावा लागतो, ज्यात अधिवासाचे विखंडन, रोगजनक आणि कीटकनाशके 3,4 यांचा समावेश आहे.कीटकनाशकांमध्ये, बुरशीनाशके ऊर्जा वाढ, चारा घालणे5 आणि शरीराची स्थिती 6,7 कमी करतात.मेसन मधमाशांच्या आरोग्यावर कॉमन्सल आणि एक्टोबॅक्टिक सूक्ष्मजीवांचा थेट परिणाम होत असल्याचे अलीकडील संशोधनाने सुचवले असले तरी, 8,9 कारण जिवाणू आणि बुरशी पोषण आणि रोगप्रतिकारक प्रतिक्रियांवर प्रभाव टाकू शकतात, मेसन मधमाशांच्या सूक्ष्मजीव विविधतेवर बुरशीनाशकाच्या प्रदर्शनाचे परिणाम नुकतेच होऊ लागले आहेत. अभ्यास.
सफरचंद स्कॅब, कडू रॉट, ब्राऊन रॉट आणि पावडर बुरशी 10,11 यांसारख्या रोगांवर उपचार करण्यासाठी विविध प्रभावांचे (संपर्क आणि पद्धतशीर) बुरशीनाशक फुलांच्या आधी आणि फुलांच्या दरम्यान बागांमध्ये फवारले जातात.बुरशीनाशके परागकणांसाठी निरुपद्रवी मानली जातात, म्हणून फुलांच्या कालावधीत गार्डनर्सना त्यांची शिफारस केली जाते;मधमाश्यांद्वारे या बुरशीनाशकांचा प्रादुर्भाव आणि अंतर्ग्रहण तुलनेने सर्वज्ञात आहे, कारण तो यूएस पर्यावरण संरक्षण संस्था आणि इतर अनेक राष्ट्रीय नियामक संस्था 12,13,14 द्वारे कीटकनाशक नोंदणी प्रक्रियेचा भाग आहे.तथापि, मधमाशी नसलेल्या बुरशीनाशकांचे परिणाम कमी ज्ञात आहेत कारण युनायटेड स्टेट्स 15 मध्ये विपणन अधिकृतता करारांतर्गत त्यांची आवश्यकता नाही.याव्यतिरिक्त, एकल मधमाशांच्या चाचणीसाठी साधारणपणे कोणतेही प्रमाणित प्रोटोकॉल नाहीत 16,17, आणि चाचणीसाठी मधमाश्या पुरवणाऱ्या वसाहतींची देखभाल करणे आव्हानात्मक आहे.जंगली मधमाशांवर कीटकनाशकांच्या परिणामांचा अभ्यास करण्यासाठी युरोप आणि यूएसएमध्ये वेगवेगळ्या व्यवस्थापित मधमाशांच्या चाचण्या वाढत्या प्रमाणात घेतल्या जात आहेत आणि अलीकडेच O. cornifrons19 साठी प्रमाणित प्रोटोकॉल विकसित केले गेले आहेत.
शिंगे असलेल्या मधमाश्या मोनोसाइट्स असतात आणि मधमाशांसाठी पूरक किंवा बदली म्हणून कार्प पिकांमध्ये व्यावसायिकरित्या वापरल्या जातात.या मधमाश्या मार्च ते एप्रिल दरम्यान बाहेर पडतात, ज्यामध्ये अपूर्व नर मादीच्या तीन ते चार दिवस आधी बाहेर पडतात.संभोगानंतर, मादी सक्रियपणे परागकण आणि अमृत गोळा करते ज्यामुळे ट्यूबुलर नेस्ट पोकळी (नैसर्गिक किंवा कृत्रिम) 1,20 मध्ये ब्रूड पेशींची मालिका मिळते.पेशींच्या आत परागकणांवर अंडी घातली जातात;त्यानंतर पुढील पेशी तयार करण्यापूर्वी मादी मातीची भिंत बांधते.प्रथम इनस्टार अळ्या कोरिओनमध्ये बंदिस्त असतात आणि भ्रूण द्रवपदार्थ खातात.दुसऱ्या ते पाचव्या इन्स्टार (प्रीपुपा) पर्यंत, अळ्या परागकण 22 वर खातात.परागकणांचा पुरवठा पूर्णपणे संपल्यानंतर, अळ्या कोकून, प्युपेट बनवतात आणि त्याच ब्रूड चेंबरमध्ये प्रौढ म्हणून उदयास येतात, सामान्यतः उन्हाळ्याच्या शेवटी 20,23.प्रौढ पुढील वसंत ऋतु उदयास येतात.प्रौढांचे जगणे हे अन्नाच्या सेवनावर आधारित निव्वळ ऊर्जा वाढीशी (वजन वाढणे) संबंधित आहे.अशा प्रकारे, परागकणांची पौष्टिक गुणवत्ता, तसेच इतर घटक जसे की हवामान किंवा कीटकनाशकांचा संपर्क, हे जगण्याचे आणि आरोग्याचे निर्धारक आहेत24.
फुलांच्या आधी लावलेली कीटकनाशके आणि बुरशीनाशके रोपाच्या संवहनीमध्ये बदलत्या प्रमाणात, ट्रान्सलामिनार (उदा. पानांच्या वरच्या पृष्ठभागापासून खालच्या पृष्ठभागावर जाण्यास सक्षम, काही बुरशीनाशकांप्रमाणे) 25 ते खरोखरच प्रणालीगत परिणामांपर्यंत बदलू शकतात., जे मुळांपासून मुकुटात प्रवेश करू शकतात, सफरचंदाच्या फुलांच्या अमृतात प्रवेश करू शकतात, जेथे ते प्रौढ O. कॉर्निफ्रॉन्स27 मारू शकतात.काही कीटकनाशके देखील परागकणांमध्ये जातात, ज्यामुळे मक्याच्या अळ्यांच्या विकासावर परिणाम होतो आणि त्यांचा मृत्यू होतो19.इतर अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की काही बुरशीनाशके संबंधित प्रजाती O. lignaria28 च्या घरट्याच्या वर्तनात लक्षणीय बदल करू शकतात.याव्यतिरिक्त, प्रयोगशाळा आणि क्षेत्रीय अभ्यास ज्यामध्ये कीटकनाशकांच्या प्रदर्शनाची परिस्थिती (बुरशीनाशकांसह) अनुकरण केली जाते, असे दिसून आले आहे की कीटकनाशके शरीरविज्ञान 22 आकारविज्ञान 29 आणि मधमाश्या आणि काही एकाकी मधमाशांच्या अस्तित्वावर नकारात्मक परिणाम करतात.फुलांच्या दरम्यान खुल्या फुलांवर थेट लागू केलेल्या विविध बुरशीनाशक फवारण्या प्रौढांद्वारे अळ्यांच्या विकासासाठी गोळा केलेले परागकण दूषित करू शकतात, ज्याच्या परिणामांचा अभ्यास करणे बाकी आहे30.
हे वाढत्या प्रमाणात ओळखले जाते की अळ्यांच्या विकासावर परागकण आणि पाचन तंत्राच्या सूक्ष्मजीव समुदायांवर प्रभाव पडतो.मधमाशी मायक्रोबायोम बॉडी मास 31, चयापचयातील बदल 22 आणि रोगजनकांची संवेदनशीलता 32 सारख्या घटकांवर प्रभाव टाकते.मागील अभ्यासांनी एकट्या मधमाशांच्या मायक्रोबायोमवर विकासाची अवस्था, पोषक तत्वे आणि पर्यावरणाचा प्रभाव तपासला आहे.या अभ्यासातून लार्व्हा आणि परागकण मायक्रोबायोम्स 33 ची रचना आणि विपुलता, तसेच एकांत मधमाशी प्रजातींमध्ये स्यूडोमोनास आणि डेल्फ्टिया या सर्वात सामान्य जिवाणू प्रजातींमध्ये समानता दिसून आली.तथापि, जरी बुरशीनाशके मधमाश्यांच्या आरोग्याचे रक्षण करण्याच्या धोरणांशी निगडीत आहेत, परंतु थेट तोंडी संपर्काद्वारे लार्व्हा मायक्रोबायोटावर बुरशीनाशकांचा प्रभाव शोधलेला नाही.
या अभ्यासात युनायटेड स्टेट्समधील झाडांच्या फळांवर वापरण्यासाठी नोंदणीकृत सहा सामान्यतः वापरल्या जाणाऱ्या बुरशीनाशकांच्या वास्तविक-जगातील डोसच्या परिणामांची चाचणी केली गेली, ज्यात दूषित अन्नातून कॉर्न हॉर्नवॉर्म मॉथ अळ्यांना तोंडी दिलेली संपर्क आणि पद्धतशीर बुरशीनाशके यांचा समावेश आहे.आम्हाला आढळले की संपर्क आणि पद्धतशीर बुरशीनाशके मधमाशांच्या शरीराचे वजन वाढवतात आणि मृत्यू दरात वाढ करतात, मॅन्कोझेब आणि पायरिथिओपाइडशी संबंधित सर्वात गंभीर परिणाम.त्यानंतर आम्ही मॅन्कोझेब-उपचारित परागकण आहारावर खाल्लेल्या अळ्यांच्या सूक्ष्मजीवांच्या विविधतेची तुलना नियंत्रण आहारात दिलेल्या अळ्यांशी केली.आम्ही एकात्मिक कीटक आणि परागकण व्यवस्थापन (IPPM) 36 कार्यक्रमांसाठी अंतर्निहित संभाव्य मृत्यू आणि परिणामांवर चर्चा करतो.
कोकूनमध्ये ओव्हरविंटरिंग करणारे प्रौढ O. कॉर्निफ्रॉन फ्रूट रिसर्च सेंटर, बिगलरविले, PA येथून मिळवले गेले आणि −3 ते 2°C (±0.3°C) तापमानात साठवले गेले.प्रयोगापूर्वी (एकूण 600 कोकून).मे 2022 मध्ये, 100 O. कॉर्निफ्रॉन कोकून दररोज प्लास्टिकच्या कपमध्ये (50 कोकून प्रति कप, DI 5 सेमी × 15 सेमी लांब) मध्ये हस्तांतरित केले गेले आणि कपमध्ये उघडण्यास प्रोत्साहन देण्यासाठी आणि चघळण्यायोग्य सब्सट्रेट प्रदान करण्यासाठी वाइप्स ठेवण्यात आले, ज्यामुळे खडकावरील ताण कमी झाला. मधमाश्या 37कीटकांच्या पिंजऱ्यात कोकून असलेले दोन प्लास्टिकचे कप (30 × 30 × 30 सेमी, बगडॉर्म मेगाव्ह्यू सायन्स कंपनी लि., तैवान) 10 मिली फीडरसह 50% सुक्रोज सोल्यूशनसह ठेवा आणि बंद आणि वीण सुनिश्चित करण्यासाठी चार दिवस साठवा.23°C, सापेक्ष आर्द्रता 60%, फोटोपीरियड 10 l (कमी तीव्रता): 14 दिवस.100 संभोग केलेल्या मादी आणि नरांना दररोज सकाळी सहा दिवसांसाठी (100 प्रतिदिन) सफरचंदाच्या शिखराच्या फुलांच्या दरम्यान दोन कृत्रिम घरट्यांमध्ये सोडण्यात आले (सापळ्याचे घरटे: रुंदी 33.66 × उंची 30.48 × लांबी 46.99 सेमी; पूरक आकृती 1).पेनसिल्व्हेनिया स्टेट आर्बोरेटम येथे, चेरीजवळ (प्रुनस सेरासस 'युबँक' स्वीट चेरी पाय™), पीच (प्रुनस पर्सिका 'स्पर्धक'), प्रुनस पर्सिका 'पीएफ 27A' फ्लेमिन फ्युरी®), नाशपाती (पायरस पेरिफोलिया 'ऑलिम्पिक', पीअर पेरिफोलिया 'शिंको', पायरस पेरिफोलिया 'शिनसेकी'), कोरोनरिया सफरचंद वृक्ष (मालुस कोरोनरिया) आणि सफरचंद वृक्षांच्या असंख्य जाती (मालुस कोरोनरिया, मालुस), घरगुती सफरचंद वृक्ष 'को-ऑप 30′ Enterprise™, मालुस सफरचंद वृक्ष 'सह- Op 31′ Winecrisp™, बेगोनिया 'फ्रीडम', बेगोनिया 'गोल्डन डेलिशियस', बेगोनिया 'नोव्हा स्पाय').प्रत्येक निळ्या रंगाचे प्लास्टिकचे पक्षीगृह दोन लाकडी पेट्यांच्या वर बसते.प्रत्येक नेस्ट बॉक्समध्ये 800 रिकाम्या क्राफ्ट पेपर ट्यूब्स असतात (स्पायरल ओपन, 0.8 सेमी आयडी × 15 सेमी एल) (जोन्सविले पेपर ट्यूब कं, मिशिगन) अपारदर्शक सेलोफेन ट्यूबमध्ये घातल्या जातात (0.7 OD पहा प्लास्टिक प्लग (T-1X प्लग) नेस्टिंग साइट प्रदान करतात. .
दोन्ही घरटे पूर्वेकडे तोंड करून हिरव्या प्लास्टिक बागेच्या कुंपणाने झाकलेले होते (एव्हरबिल्ट मॉडेल #889250EB12, ओपनिंग साइज 5 × 5 सेमी, 0.95 मीटर × 100 मीटर) उंदीर आणि पक्षी प्रवेश रोखण्यासाठी आणि घरटे मातीच्या शेजारी मातीच्या पृष्ठभागावर ठेवलेले होते. बॉक्सनेस्ट बॉक्स (पूरक आकृती 1a).कॉर्न बोररची अंडी दररोज घरट्यांमधून 30 नळ्या गोळा करून प्रयोगशाळेत नेण्यात आली.कात्री वापरून, ट्यूबच्या शेवटी एक कट करा, नंतर ब्रूड पेशी उघड करण्यासाठी सर्पिल ट्यूब वेगळे करा.वक्र स्पॅटुला (मायक्रोस्लाइड टूल किट, बायोक्विप प्रॉडक्ट्स इंक., कॅलिफोर्निया) वापरून वैयक्तिक अंडी आणि त्यांचे परागकण काढले गेले.आमच्या प्रयोगांमध्ये (पूरक आकृती 1b-d) वापरण्यापूर्वी अंडी ओलसर फिल्टर पेपरवर उबवली गेली आणि 2 तास पेट्री डिशमध्ये ठेवली गेली.
प्रयोगशाळेत, आम्ही सफरचंद मोहोराच्या आधी आणि दरम्यान लागू केलेल्या सहा बुरशीनाशकांच्या तोंडी विषाक्ततेचे मूल्यमापन तीन एकाग्रतेवर केले (0.1X, 0.5X, आणि 1X, जेथे 1X हे प्रति 100 गॅलन पाणी/एकर लागू केलेले चिन्ह आहे. उच्च फील्ड डोस = एकाग्रता शेतात)., तक्ता 1).प्रत्येक एकाग्रता 16 वेळा पुनरावृत्ती होते (n = 16).दोन संपर्क बुरशीनाशके (टेबल S1: mancozeb 2696.14 ppm आणि captan 2875.88 ppm) आणि चार प्रणालीगत बुरशीनाशके (Table S1: pyrithiostrobin 250.14 ppm; trifloxystrobin 110.06 ppm; myclobutanil azole p.85pm 2.85pm); फळे, भाज्या आणि शोभिवंत पिके .आम्ही ग्राइंडरचा वापर करून परागकण एकसंध केले, 0.20 ग्रॅम एका विहिरीत (24-विहीर फाल्कन प्लेट) हस्तांतरित केले आणि 1 μL बुरशीनाशक द्रावण जोडले आणि मिसळून पिरॅमिडल परागकण तयार करण्यासाठी 1 मिमी खोल विहिरी ज्यामध्ये अंडी ठेवली होती.मिनी स्पॅटुला वापरून ठेवा (पूरक आकृती 1c,d).फाल्कन प्लेट्स खोलीच्या तपमानावर (25 डिग्री सेल्सिअस) आणि 70% सापेक्ष आर्द्रतेवर संग्रहित केल्या गेल्या.आम्ही त्यांची तुलना नियंत्रण अळ्यांनी शुद्ध पाण्याने उपचार केलेल्या एकसंध परागकण आहाराशी केली.विश्लेषणात्मक शिल्लक (फिशर सायंटिफिक, अचूकता = 0.0001 ग्रॅम) वापरून अळ्या प्रीप्युपल वयापर्यंत पोहोचेपर्यंत आम्ही मृत्यूची नोंद केली आणि अळ्यांचे वजन दर दुसऱ्या दिवशी मोजले.शेवटी, 2.5 महिन्यांनंतर कोकून उघडून लिंग गुणोत्तराचे मूल्यांकन केले गेले.
संपूर्ण O. कॉर्निफ्रॉन अळ्या (n = 3 प्रति उपचार स्थिती, मॅन्कोझेब-उपचार केलेले आणि उपचार न केलेले परागकण) पासून डीएनए काढण्यात आला आणि आम्ही या नमुन्यांवर सूक्ष्मजीव विविधतेचे विश्लेषण केले, विशेषत: मॅन्कोझेबमध्ये अळ्यांमध्ये सर्वाधिक मृत्यू दिसून आला.MnZn प्राप्त करत आहे.DNA वाढवले ​​गेले, DNAZymoBIOMICS®-96 MagBead DNA किट (Zymo Research, Irvine, CA) वापरून शुद्ध केले गेले आणि v3 किट वापरून Illumina® MiSeq™ वर अनुक्रमित (600 सायकल) केले गेले.जिवाणू 16S ribosomal RNA जनुकांचे लक्ष्यित अनुक्रम क्विक-16S™ NGS लायब्ररी प्रेप किट (Zymo Research, Irvine, CA) वापरून 16S rRNA जनुकाच्या V3-V4 क्षेत्राला लक्ष्य करणारे प्राइमर्स वापरून केले गेले.याव्यतिरिक्त, 10% PhiX समावेश वापरून 18S अनुक्रम केले गेले आणि प्राइमर जोडी 18S001 आणि NS4 वापरून प्रवर्धन केले गेले.
QIIME2 पाइपलाइन (v2022.11.1) वापरून पेअर केलेले रीड्स 39 आयात आणि प्रक्रिया करा.हे रीड ट्रिम केले गेले आणि विलीन केले गेले आणि QIIME2 (qiime dada2 नॉइझ पेअरिंग) 40 मधील DADA2 प्लगइन वापरून काइमरिक अनुक्रम काढले गेले.16S आणि 18S वर्ग असाइनमेंट क्लासिफाय-स्क्लेर्न आणि प्री-ट्रेन्ड आर्टिफॅक्ट सिल्वा-१३८-९९-एनबी-क्लासिफायर या ऑब्जेक्ट क्लासिफायर प्लगइनचा वापर करून पार पाडण्यात आल्या.
सर्व प्रायोगिक डेटा सामान्यता (शापिरो-विल्क्स) आणि भिन्नतेची एकसंधता (लेव्हेनची चाचणी) तपासली गेली.डेटा सेट पॅरामेट्रिक विश्लेषणाच्या गृहितकांची पूर्तता करत नसल्यामुळे आणि अवशेषांचे प्रमाणीकरण करण्यात परिवर्तन अयशस्वी ठरल्यामुळे, आम्ही दोन घटकांसह नॉन-पॅरामेट्रिक द्वि-मार्ग ANOVA (क्रस्कल-वॉलिस) केले [वेळ (तीन-टप्प्या 2, 5 आणि 8 दिवस) टाइम पॉइंट्स) आणि बुरशीनाशक] अळ्यांच्या ताज्या वजनावरील उपचारांच्या परिणामाचे मूल्यांकन करण्यासाठी, नंतर विल्कॉक्सन चाचणी वापरून नॉनपॅरामेट्रिक जोडीनुसार तुलना केली गेली.आम्ही तीन बुरशीनाशक सांद्रता 41,42 मध्ये जगण्यावर बुरशीनाशकांच्या प्रभावांची तुलना करण्यासाठी पॉसॉन वितरणासह सामान्यीकृत रेखीय मॉडेल (GLM) वापरले.विभेदक विपुलता विश्लेषणासाठी, ॲम्प्लिकॉन सीक्वेन्स व्हेरियंटची संख्या (ASVs) जीनस स्तरावर संकुचित झाली.16S (जीनस लेव्हल) आणि 18S सापेक्ष विपुलता वापरणाऱ्या गटांमधील विभेदक विपुलतेची तुलना स्थिती, स्केल आणि आकार (GAMLSS) साठी बीटा झिरो-इन्फ्लेटेड (BEZI) फॅमिली डिस्ट्रिब्यूशनसह सामान्यीकृत ऍडिटीव्ह मॉडेल वापरून केली गेली, जी मॅक्रोवर मॉडेल केली गेली होती. .मायक्रोबायोम R43 (v1.1) मध्ये.1).विभेदक विश्लेषणापूर्वी माइटोकॉन्ड्रियल आणि क्लोरोप्लास्ट प्रजाती काढून टाका.18S च्या भिन्न वर्गीकरण स्तरांमुळे, प्रत्येक वर्गीकरणाची फक्त सर्वात खालची पातळी विभेदक विश्लेषणासाठी वापरली गेली.सर्व सांख्यिकीय विश्लेषणे R (v. 3.4.3., CRAN प्रकल्प) (टीम 2013) वापरून केली गेली.
मॅन्कोझेब, पायरिथियोस्ट्रोबिन आणि ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिनच्या संपर्कामुळे ओ. कॉर्निफ्रॉन्स (चित्र 1) मधील शरीराचे वजन लक्षणीयरीत्या कमी झाले.मूल्यांकन केलेल्या सर्व तीन डोससाठी हे परिणाम सातत्याने दिसून आले (चित्र 1a–c).सायक्लोस्ट्रोबिन आणि मायक्लोब्युटॅनिलने अळ्यांचे वजन लक्षणीयरित्या कमी केले नाही.
स्टेम बोरर अळ्यांचे सरासरी ताजे वजन चार आहाराच्या उपचारांतर्गत तीन वेळा मोजले जाते (एकसंध परागकण खाद्य + बुरशीनाशक: नियंत्रण, 0.1X, 0.5X आणि 1X डोस).(a) कमी डोस (0.1X): प्रथम वेळ बिंदू (दिवस 1): χ2: 30.99, DF = 6;P < 0.0001, दुसरा वेळ पॉइंट (दिवस 5): 22.83, DF = 0.0009;तिसरी वेळ;बिंदू (दिवस 8): χ2: 28.39, DF = 6;(b) अर्धा डोस (0.5X): प्रथम वेळ बिंदू (दिवस 1): χ2: 35.67, DF = 6;P < 0.0001, दुसऱ्यांदा पॉइंट (दिवस पहिला).): χ2: 15.98, DF = 6;पी = 0.0090;तिसरा वेळ बिंदू (दिवस 8) χ2: 16.47, DF = 6;(c) साइट किंवा पूर्ण डोस (1X): प्रथम वेळ बिंदू (दिवस 1) χ2: 20.64, P = 6;P = 0.0326, दुसरी वेळ बिंदू (दिवस 5): χ2: 22.83, DF = 6;पी = 0.0009;तिसरा वेळ बिंदू (दिवस 8): χ2: 28.39, DF = 6;भिन्नतेचे नॉनपॅरामेट्रिक विश्लेषण.बार्स जोडीनिहाय तुलना (α = 0.05) (n = 16) *P ≤ 0.05, **P ≤ 0.001, ***P ≤ 0.0001 च्या सरासरी ± SE चे प्रतिनिधित्व करतात.
सर्वात कमी डोसमध्ये (0.1X), लार्व्हाचे शरीर वजन ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिनसह 60%, मॅन्कोझेबसह 49%, मायक्लोब्युटॅनिलसह 48% आणि पायरिथिस्ट्रोबिन (चित्र 1a) सह 46% कमी होते.अर्ध्या फील्ड डोसच्या (0.5X) संपर्कात आल्यावर, मॅन्कोझेब अळ्यांचे शरीराचे वजन 86%, पायरिथियोस्ट्रोबिन 52% आणि ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिन 50% (चित्र 1b) ने कमी होते.मॅन्कोझेबच्या पूर्ण फील्ड डोसने (1X) लार्व्हाचे वजन 82%, पायरिथिओस्ट्रोबिन 70% आणि ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिन, मायक्लोब्युटॅनिल आणि सँगर्ड अंदाजे 30% (चित्र 1c) कमी केले.
मॅन्कोझेब-उपचार केलेल्या परागकणांच्या अळ्यांमध्ये मृत्यूचे प्रमाण सर्वाधिक होते, त्यानंतर पायरिथिओस्ट्रोबिन आणि ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिन यांचा क्रमांक लागतो.मॅन्कोझेब आणि पायरीटिसॉलीनच्या वाढत्या डोसमुळे मृत्यूचे प्रमाण वाढले (चित्र 2; तक्ता 2).तथापि, ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिन सांद्रता वाढल्याने कॉर्न बोरर मृत्यू दरात थोडीशी वाढ झाली;नियंत्रण उपचारांच्या तुलनेत सायप्रोडिनिल आणि कॅप्टनने मृत्यूदरात लक्षणीय वाढ केली नाही.
सहा वेगवेगळ्या बुरशीनाशकांनी वैयक्तिकरित्या उपचार केलेल्या परागकणांच्या अंतर्ग्रहणानंतर बोरर फ्लाय अळ्यांच्या मृत्यूची तुलना केली गेली.मॅन्कोझेब आणि पेंटोपायरामाइड कॉर्न मॅगॉट्स (GLM: χ = 29.45, DF = 20, P = 0.0059) (रेषा, उतार = 0.29, P < 0.001; उतार = 0.24, P) तोंडावाटे संपर्कास अधिक संवेदनशील होते.
सरासरी, सर्व उपचारांमध्ये, 39.05% रुग्ण महिला आणि 60.95% पुरुष होते.नियंत्रण उपचारांमध्ये, कमी-डोस (0.1X) आणि अर्ध-डोस (0.5X) अभ्यासांमध्ये महिलांचे प्रमाण 40% आणि फील्ड-डोस (1X) अभ्यासांमध्ये 30% होते.0.1X डोसमध्ये, मॅन्कोझेब आणि मायक्लोब्युटॅनिलने उपचार केलेल्या परागकण-फेड अळ्यांमध्ये, 33.33% प्रौढ मादी होत्या, 22% प्रौढ मादी होत्या, 44% प्रौढ अळ्या होत्या, 44% प्रौढ अळ्या होत्या.मादी, 41% प्रौढ अळ्या मादी होत्या, आणि नियंत्रण 31% होते (चित्र 3a).डोसच्या 0.5 पटीने, मॅन्कोझेब आणि पायरिथियोस्ट्रोबिन गटातील 33% प्रौढ वर्म्स मादी, 36% ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिन गटात, 41% मायक्लोब्युटॅनिल गटात आणि 46% सायप्रोस्ट्रोबिन गटात होते.हा आकडा गटात 53% होता.कॅप्टन गटात आणि 38% नियंत्रण गटात (चित्र 3b).1X डोसमध्ये, मॅन्कोझेब गटातील 30% स्त्रिया, 36% पायरिथिओस्ट्रोबिन गट, 44% ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिन गट, 38% मायक्लोब्युटॅनिल गट, 50% नियंत्रण गट स्त्रिया होत्या – 38.5% (चित्र 3c) .
अळ्या अवस्थेतील बुरशीनाशकाच्या प्रादुर्भावानंतर मादी आणि पुरुष बोअरची टक्केवारी.(a) कमी डोस (0.1X).(b) अर्धा डोस (0.5X).(c) फील्ड डोस किंवा पूर्ण डोस (1X).
16S अनुक्रम विश्लेषणात असे दिसून आले की मॅन्कोझेब-उपचारित परागकणांनी खायला दिलेले अळ्या आणि उपचार न केलेले परागकण (चित्र 4a) दिलेले अळ्या यांच्यात जिवाणूंचा गट फरक आहे.परागकणांवर उपचार न केलेल्या अळ्यांचा सूक्ष्मजंतू निर्देशांक मॅन्कोझेब-उपचार केलेल्या परागकणांवर खायला दिलेल्या अळ्यांपेक्षा जास्त होता (चित्र 4b).जरी गटांमधील समृद्धीमध्ये आढळून आलेला फरक सांख्यिकीयदृष्ट्या महत्त्वपूर्ण नसला तरी, उपचार न केलेल्या परागकणांवर (चित्र 4c) अन्न देणाऱ्या अळ्यांपेक्षा ते लक्षणीयरीत्या कमी होते.सापेक्ष विपुलतेने असे दिसून आले की नियंत्रण परागकणांवर भरलेल्या अळ्यांचा मायक्रोबायोटा मॅन्कोझेब-उपचार केलेल्या अळ्यांपेक्षा (चित्र 5a) अधिक वैविध्यपूर्ण आहे.वर्णनात्मक विश्लेषणाने नियंत्रणात 28 जनरी आणि मॅन्कोझेब-उपचारित नमुने (चित्र 5b) आढळून आले.c 18S अनुक्रम वापरून केलेल्या विश्लेषणात कोणतेही महत्त्वपूर्ण फरक दिसून आले नाहीत (पूरक आकृती 2).
16S अनुक्रमांवर आधारित SAV प्रोफाइलची तुलना शॅनन समृद्धीशी केली गेली आणि फिलम स्तरावर समृद्धता पाहिली.(a) उपचार न केलेले परागकण किंवा नियंत्रण (निळा) आणि मॅन्कोझेब-फेड अळ्या (नारिंगी) मध्ये एकूण सूक्ष्मजीव समुदाय संरचनेवर आधारित मुख्य समन्वय विश्लेषण (पीसीओए).प्रत्येक डेटा पॉइंट स्वतंत्र नमुना दर्शवतो.मल्टीव्हेरिएट टी वितरणाचे ब्रे-कर्टिस अंतर वापरून पीसीओएची गणना केली गेली.ओव्हल 80% आत्मविश्वास पातळी दर्शवतात.(b) बॉक्सप्लॉट, रॉ शॅनन संपत्ती डेटा (पॉइंट) आणि c.प्रेक्षणीय संपत्ती.बॉक्सप्लॉट्स मध्य रेखा, इंटरक्वार्टाइल रेंज (IQR), आणि 1.5 × IQR (n = 3) साठी बॉक्स दाखवतात.
मॅन्कोझेब-उपचारित आणि उपचार न केलेल्या परागकणांवर पोसलेल्या अळ्यांच्या सूक्ष्मजीव समुदायांची रचना.(a) अळ्यांमध्ये सूक्ष्मजैविक वंशाचे सापेक्ष विपुल प्रमाणात वाचन होते.(b) ओळखलेल्या सूक्ष्मजीव समुदायांचा उष्णता नकाशा.डेल्फ्टिया (विषमतेचे प्रमाण (OR) = 0.67, P = 0.0030) आणि स्यूडोमोनास (OR = 0.3, P = 0.0074), मायक्रोबॅक्टेरियम (OR = 0.75, P = 0.0617) (OR = 1.5, P = 0.0060);उष्णता नकाशाच्या पंक्ती परस्परसंबंध अंतर आणि सरासरी कनेक्टिव्हिटी वापरून क्लस्टर केल्या आहेत.
आमचे परिणाम असे दर्शवतात की तोंडावाटे संपर्क (मॅन्कोझेब) आणि सिस्टिमिक (पायरोस्ट्रोबिन आणि ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिन) बुरशीनाशके, फुलांच्या दरम्यान मोठ्या प्रमाणावर लागू केल्याने, वजनात लक्षणीय घट आणि मक्याच्या अळ्यांच्या मृत्यूचे प्रमाण वाढते.याव्यतिरिक्त, मॅन्कोझेबने प्रीपुपल स्टेज दरम्यान मायक्रोबायोमची विविधता आणि समृद्धता लक्षणीयरीत्या कमी केली.मायक्लोब्युटॅनिल, आणखी एक पद्धतशीर बुरशीनाशक, तीनही डोसमध्ये लार्व्हाच्या शरीराचे वजन लक्षणीयरीत्या कमी करते.हा प्रभाव दुसऱ्या (दिवस 5) आणि तिसरा (दिवस 8) वेळ बिंदूंवर स्पष्ट होता.याउलट, सायप्रोडिनिल आणि कॅप्टनने नियंत्रण गटाच्या तुलनेत वजन वाढणे किंवा टिकून राहणे लक्षणीयरीत्या कमी केले नाही.आमच्या माहितीनुसार, परागकणांच्या थेट प्रदर्शनाद्वारे कॉर्न पिकांचे संरक्षण करण्यासाठी वापरल्या जाणाऱ्या वेगवेगळ्या बुरशीनाशकांच्या फील्ड रेटचे परिणाम निश्चित करण्याचे हे काम पहिले आहे.
नियंत्रण उपचारांच्या तुलनेत सर्व बुरशीनाशक उपचारांनी शरीराचे वजन लक्षणीयरीत्या कमी केले.मॅन्कोझेबचा सर्वात जास्त परिणाम लार्व्हाच्या शरीराच्या वजनात सरासरी 51% घट झाला, त्यानंतर पायरिथिओस्ट्रोबिनचा क्रमांक लागतो.तथापि, इतर अभ्यासांनी अळ्यांच्या टप्प्यांवर बुरशीनाशकांच्या फील्ड डोसचे प्रतिकूल परिणाम नोंदवलेले नाहीत.जरी डायथिओकार्बामेट बायोसाइड्समध्ये कमी तीव्र विषाक्तता 45 असल्याचे दर्शविले गेले असले तरी, इथिलीन बिस्डिथिओकार्बामेट्स (EBDCS) जसे की मॅन्कोझेब युरिया इथिलीन सल्फाइडमध्ये खराब होऊ शकतात.इतर प्राण्यांमध्ये त्याचे म्युटेजेनिक प्रभाव पाहता, हे निकृष्ट उत्पादन 46,47 च्या निरीक्षणासाठी जबाबदार असू शकते.पूर्वीच्या अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की इथिलीन थिओरियाची निर्मिती भारदस्त तापमान48, आर्द्रता पातळी49 आणि उत्पादनाच्या साठवणुकीची लांबी 50 यांसारख्या घटकांनी प्रभावित होते.बायोसाइड्ससाठी योग्य स्टोरेज परिस्थिती हे दुष्परिणाम कमी करू शकतात.याव्यतिरिक्त, युरोपियन फूड सेफ्टी ऑथॉरिटीने पायरिथिओपाइडच्या विषारीपणाबद्दल चिंता व्यक्त केली आहे, जे इतर प्राण्यांच्या पचनसंस्थेसाठी कार्सिनोजेनिक असल्याचे दर्शविले गेले आहे51.
मॅन्कोझेब, पायरिथिओस्ट्रोबिन आणि ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिनच्या तोंडी वापरामुळे कॉर्न बोरर अळ्यांचा मृत्यू होतो.याउलट, मायक्लोब्युटॅनिल, सिप्रोसायक्लिन आणि कॅप्टन यांचा मृत्यूदरावर कोणताही परिणाम झाला नाही.हे परिणाम Ladurner et al.52 पेक्षा वेगळे आहेत, ज्यांनी दाखवले की कॅप्टनने प्रौढ O. lignaria आणि Apis mellifera L. (Hymenoptera, Apisidae) चे अस्तित्व लक्षणीयरीत्या कमी केले.याव्यतिरिक्त, कॅप्टन आणि बॉस्कॅलिड सारख्या बुरशीनाशकांमुळे अळ्यांचा मृत्यू होतो52,53,54 किंवा आहार वर्तनात बदल होतो.या बदलांमुळे परागकणांच्या पौष्टिक गुणवत्तेवर आणि शेवटी लार्व्हा अवस्थेतील ऊर्जा वाढीवर परिणाम होऊ शकतो.नियंत्रण गटामध्ये आढळून आलेली मृत्युदर इतर अभ्यासांशी सुसंगत होती 56,57.
आमच्या कामात आढळलेले पुरुष-अनुकूल लिंग गुणोत्तर हे फुलांच्या दरम्यान अपुरी वीण आणि खराब हवामान यांसारख्या घटकांद्वारे स्पष्ट केले जाऊ शकते, जसे पूर्वी व्हिसेन्स आणि बॉश यांनी ओ. कॉर्नुटा साठी सुचवले होते.जरी आमच्या अभ्यासातील महिला आणि पुरुषांना सोबतीसाठी चार दिवसांचा कालावधी होता (सामान्यत: यशस्वी समागमासाठी पुरेसा कालावधी मानला जातो), आम्ही तणाव कमी करण्यासाठी जाणीवपूर्वक प्रकाशाची तीव्रता कमी केली.तथापि, हा फेरफार अनावधानाने वीण प्रक्रियेत व्यत्यय आणू शकतो61.याव्यतिरिक्त, मधमाश्या अनेक दिवस प्रतिकूल हवामानाचा अनुभव घेतात, ज्यात पाऊस आणि कमी तापमान (<5°C) यांचा समावेश होतो, ज्यामुळे संभोगाच्या यशावर नकारात्मक परिणाम होऊ शकतो4,23.
आमचा अभ्यास संपूर्ण लार्व्हा मायक्रोबायोमवर केंद्रित असला तरी, आमचे परिणाम जिवाणू समुदायांमधील संभाव्य संबंधांबद्दल अंतर्दृष्टी देतात जे मधमाशी पोषण आणि बुरशीनाशक प्रदर्शनासाठी गंभीर असू शकतात.उदाहरणार्थ, अळ्यांनी खाल्लेल्या मॅन्कोझेब-उपचार केलेल्या परागकणांनी अळ्यांना उपचार न केलेल्या परागकणांच्या तुलनेत सूक्ष्मजीव समुदायाची रचना आणि विपुलता लक्षणीयरीत्या कमी केली होती.उपचार न केलेले परागकण वापरणाऱ्या अळ्यांमध्ये, प्रोटीओबॅक्टेरिया आणि ॲक्टिनोबॅक्टेरिया हे जीवाणू गट प्रबळ होते आणि ते प्रामुख्याने एरोबिक किंवा फॅकल्टीव्हली एरोबिक होते.डेल्फ्ट बॅक्टेरिया, सामान्यत: एकट्या मधमाशी प्रजातींशी संबंधित, प्रतिजैविक क्रियाकलाप म्हणून ओळखले जातात, जे रोगजनकांच्या विरूद्ध संभाव्य संरक्षणात्मक भूमिका दर्शवतात.दुसरी जिवाणू प्रजाती, स्यूडोमोनास, उपचार न केलेल्या परागकणांच्या अळ्यांमध्ये मुबलक प्रमाणात होते, परंतु मॅन्कोझेब-उपचार केलेल्या अळ्यांमध्ये लक्षणीयरीत्या कमी होते.आमचे परिणाम स्यूडोमोनास O. bicornis35 आणि इतर एकांत वासे 34 मधील सर्वात विपुल प्रजातींपैकी एक म्हणून ओळखणाऱ्या मागील अभ्यासांना समर्थन देतात.जरी ओ. कॉर्निफ्रॉनच्या आरोग्यामध्ये स्यूडोमोनासच्या भूमिकेचा प्रायोगिक पुरावा अभ्यासला गेला नसला तरी, हा जीवाणू बीटल पेडेरस फ्यूसिपीसमधील संरक्षणात्मक विषाच्या संश्लेषणास प्रोत्साहन देतो आणि विट्रो 35, 65 मध्ये आर्जिनिन चयापचय वाढवतो असे दिसून आले आहे. ही निरीक्षणे सूचित करतात ओ. कॉर्निफ्रॉन अळ्यांच्या विकासाच्या काळात व्हायरल आणि बॅक्टेरियाच्या संरक्षणामध्ये संभाव्य भूमिका.मायक्रोबॅक्टेरियम ही आमच्या अभ्यासात ओळखली जाणारी आणखी एक जीनस आहे जी उपासमारीच्या परिस्थितीत काळ्या सोल्जर फ्लाय अळ्यांमध्ये मोठ्या संख्येने उपस्थित असल्याचे नोंदवले गेले आहे66.ओ. कॉर्निफ्रॉन अळ्यांमध्ये, सूक्ष्मजीवाणू तणावाच्या परिस्थितीत आतड्यांतील मायक्रोबायोमचे संतुलन आणि लवचिकतेसाठी योगदान देऊ शकतात.याव्यतिरिक्त, रोडोकोकस ओ. कॉर्निफ्रॉन अळ्यामध्ये आढळतो आणि त्याच्या डिटॉक्सिफिकेशन क्षमतेसाठी ओळखला जातो67.ही वंश A. फ्लोरियाच्या आतड्यातही आढळते, परंतु फार कमी प्रमाणात असते68.आमचे परिणाम असंख्य मायक्रोबियल टॅक्सामध्ये अनेक अनुवांशिक फरकांची उपस्थिती दर्शवतात जे अळ्यांमध्ये चयापचय प्रक्रिया बदलू शकतात.तथापि, O. cornifrons च्या कार्यात्मक विविधतेबद्दल अधिक चांगल्या प्रकारे समजून घेणे आवश्यक आहे.
सारांश, परिणाम असे सूचित करतात की मॅन्कोझेब, पायरिथिओस्ट्रोबिन आणि ट्रायफ्लॉक्सिस्ट्रोबिनमुळे शरीराचे वजन वाढले आणि कॉर्न बोरर अळ्यांचा मृत्यू झाला.परागकणांवर बुरशीनाशकांच्या प्रभावांबद्दल चिंता वाढत असली तरी, या संयुगांच्या अवशिष्ट चयापचयांचे परिणाम अधिक चांगल्या प्रकारे समजून घेणे आवश्यक आहे.हे परिणाम एकात्मिक परागकण व्यवस्थापन कार्यक्रमांच्या शिफारशींमध्ये समाविष्ट केले जाऊ शकतात जे शेतकऱ्यांना फळझाडांच्या फुलांच्या आधी आणि दरम्यान काही बुरशीनाशकांचा वापर टाळण्यास मदत करतात बुरशीनाशके निवडून आणि वापरण्याची वेळ बदलून किंवा कमी हानिकारक पर्यायांच्या वापरास प्रोत्साहन देऊन 36. ही माहिती शिफारसी विकसित करण्यासाठी महत्वाचे आहे.कीटकनाशकांच्या वापरावर, जसे की विद्यमान फवारणी कार्यक्रम समायोजित करणे आणि बुरशीनाशके निवडताना फवारणीची वेळ बदलणे किंवा कमी धोकादायक पर्यायांच्या वापरास प्रोत्साहन देणे.लिंग गुणोत्तर, आहार वर्तणूक, आतड्यांवरील मायक्रोबायोम आणि कॉर्न बोररचे वजन कमी करणे आणि मृत्युदरावर अंतर्निहित आण्विक यंत्रणा यावरील बुरशीनाशकांच्या प्रतिकूल परिणामांवर पुढील संशोधन आवश्यक आहे.
आकृती 1 आणि 2 मधील स्त्रोत डेटा 1, 2 आणि 3 फिगशेअर डेटा रिपॉझिटरी DOI मध्ये जमा केला गेला आहे: https://doi.org/10.6084/m9.figshare.24996245 आणि https://doi.org/10.6084/m9.figshare.24996233.सध्याच्या अभ्यासात (अंजीर 4, 5) विश्लेषित केलेले क्रम एनसीबीआय एसआरए रिपॉझिटरीमध्ये ॲक्सेसन क्रमांक PRJNA1023565 अंतर्गत उपलब्ध आहेत.
बॉश, जे. आणि केम्प, डब्ल्यूपी विकास आणि कृषी पिकांचे परागकण म्हणून मधमाशी प्रजातींची स्थापना: ओस्मिया वंशाचे उदाहरण.(Hymenoptera: Megachilidae) आणि फळझाडे.बैलNtomore.संसाधन९२, ३–१६ (२००२).
पार्कर, एमजी आणि इतर.न्यूयॉर्क आणि पेनसिल्व्हेनियामधील सफरचंद उत्पादकांमध्ये परागण पद्धती आणि पर्यायी परागकणांच्या धारणा.अद्यतनशेती.अन्न प्रणाली.35, 1–14 (2020).
Koch I., Lonsdorf EW, Artz DR, Pitts-Singer TL आणि Rickets TH इकोलॉजी आणि देशी मधमाश्या वापरून बदाम परागणाचे अर्थशास्त्र.जे. अर्थशास्त्र.Ntomore.111, 16–25 (2018).
ली, ई., हे, वाई., आणि पार्क, वाई.-एल.ट्रॅगोपन फिनोलॉजीवर हवामान बदलाचे परिणाम: लोकसंख्या व्यवस्थापनासाठी परिणाम.चढणे.150, 305–317 (2018) बदला.
Artz, DR आणि Pitts-Singer, TL प्रभाव बुरशीनाशक आणि सहायक फवारण्या दोन व्यवस्थापित एकल मधमाशांच्या घरट्याच्या वर्तनावर (ओस्मिया लिग्नेरिया आणि मेगाचिल रोटुंडटा).PloS One 10, e0135688 (2015).
ब्यूवैस, एस. आणि इतर.कमी-विषारी पीक बुरशीनाशक (फेनब्युकोनाझोल) नर पुनरुत्पादक गुणवत्तेच्या संकेतांमध्ये व्यत्यय आणते ज्यामुळे वन्य एकट्या मधमाशांमध्ये संभोगाचे यश कमी होते.जे. ॲप्स.पर्यावरणशास्त्र५९, १५९६–१६०७ (२०२२).
Sgolastra F. et al.निओनिकोटिनॉइड कीटकनाशके आणि एर्गोस्टेरॉल बायोसिंथेसिस तीन मधमाश्यांच्या प्रजातींमध्ये सिनेर्जिस्टिक बुरशीनाशक मृत्यूचे प्रमाण कमी करतात.कीटक नियंत्रण.विज्ञान७३, १२३६–१२४३ (२०१७).
कुहनेमन जेजी, गिलुंग जे, व्हॅन डायक एमटी, फोर्डिस आरएफ.आणि डॅनफोर्थ बीएन सॉलिटरी वेस्प अळ्या ऑस्मिया कॉर्निफ्रोन्स (मेगाचिलिडे) मधमाश्या स्टेम-नेस्टिंग मधमाशांना परागकणाद्वारे पुरवलेल्या जीवाणूंची विविधता बदलतात.समोरसूक्ष्मजीव13, 1057626 (2023).
धरमपाल पीएस, डॅनफोर्थ बीएन आणि स्टीफन एसए किण्वित परागकणातील एक्टोसिम्बायोटिक सूक्ष्मजीव एकट्या मधमाशांच्या विकासासाठी परागकणाइतकेच महत्त्वाचे आहेत.पर्यावरणशास्त्रउत्क्रांती12. e8788 (2022).
Kelderer M, Manici LM, Caputo F आणि Thalheimer M. सफरचंद बागांमध्ये आंतर-पंक्ती लागवड रीसीडिंग रोग नियंत्रित करण्यासाठी: सूक्ष्मजीव संकेतकांवर आधारित व्यावहारिक परिणामकारकता अभ्यास.वनस्पती माती 357, 381–393 (2012).
मार्टिन पीएल, क्रॅवचिक टी., खोडाडाडी एफ., अचिमोविच एसजी आणि पीटर केए मिड-अटलांटिक युनायटेड स्टेट्समध्ये सफरचंदांचे बिटर रॉट: कारक प्रजातींचे मूल्यांकन आणि प्रादेशिक हवामान परिस्थिती आणि लागवडीच्या संवेदनशीलतेचा प्रभाव.फायटोपॅथॉलॉजी 111, 966–981 (2021).
कुलेन एमजी, थॉम्पसन एलजे, कॅरोलन जेके, स्टाउट जेके.आणि स्टॅनले DA बुरशीनाशके, तणनाशके आणि मधमाश्या: विद्यमान संशोधन आणि पद्धतींचे पद्धतशीर पुनरावलोकन.PLOS One 14, e0225743 (2019).
पिलिंग, ED आणि Jepson, PC Synergistic effects of EBI बुरशीनाशक आणि मधमाश्या (Apis mellifera) वर पायरेथ्रॉइड कीटकनाशके.कीटक विज्ञान.३९, २९३–२९७ (१९९३).
Mussen, EC, Lopez, JE आणि Peng, CY मधमाशी अळ्या Apis mellifera L. (Hymenoptera: Apidae) च्या वाढ आणि विकासावर निवडलेल्या बुरशीनाशकांचा प्रभाव.बुधवार.Ntomore.33, 1151-1154 (2004).
व्हॅन डायक, एम., मुलान, ई., विकस्टीड, डी., आणि मॅकआर्ट, एस. वृक्षांच्या बागांमध्ये परागकणांचे संरक्षण करण्यासाठी कीटकनाशक वापरासाठी निर्णय मार्गदर्शक (कॉर्नेल विद्यापीठ, 2018).
Iwasaki, JM आणि Hogendoorn, K. मधमाशांचा गैर कीटकनाशकांच्या संपर्कात: पद्धतींचा आढावा आणि परिणाम नोंदवले.शेती.इकोसिस्टमबुधवार.314, 107423 (2021).
Kopit AM, Klinger E, Cox-Foster DL, Ramirez RA.आणि पिट्स-सिंगर टीएल ऑस्मिया लिग्नेरिया (हायमेनोप्टेरा: मेगाचिलिडे) च्या लार्व्ह विकासावर पुरवठा प्रकार आणि कीटकनाशकांच्या प्रदर्शनाचा प्रभाव.बुधवार.Ntomore.५१, २४०–२५१ (२०२२).
कोपिट एएम आणि पिट्स-सिंगर टीएल पाथवेज एकांत रिकाम्या-घरटे मधमाशांना कीटकनाशकाच्या संपर्कात आणतात.बुधवार.Ntomore.४७, ४९९–५१० (२०१८).
पॅन, एनटी इ.प्रौढ जपानी बाग मधमाश्या (ओस्मिया कॉर्निफ्रन्स) मध्ये कीटकनाशक विषारीपणाचे मूल्यांकन करण्यासाठी एक नवीन अंतर्ग्रहण बायोसे प्रोटोकॉल.विज्ञानअहवाल 10, 9517 (2020).