एडीस इजिप्ती (डिप्टेरा: क्युलिसिडे) विरुद्ध लार्व्हाइसाइडल आणि प्रौढांसाठी उपाय म्हणून वनस्पती आवश्यक तेलांवर आधारित टर्पीन संयुगे यांचे संयोजन.

Nature.com ला भेट दिल्याबद्दल धन्यवाद. तुम्ही वापरत असलेल्या ब्राउझरच्या आवृत्तीला मर्यादित CSS सपोर्ट आहे. सर्वोत्तम परिणामांसाठी, आम्ही शिफारस करतो की तुम्ही तुमच्या ब्राउझरची नवीन आवृत्ती वापरा (किंवा इंटरनेट एक्सप्लोररमध्ये कंपॅटिबिलिटी मोड अक्षम करा). दरम्यान, सतत सपोर्ट सुनिश्चित करण्यासाठी, आम्ही स्टाइलिंग किंवा जावास्क्रिप्टशिवाय साइट दाखवत आहोत.
वनस्पती-व्युत्पन्न कीटकनाशक संयुगांचे संयोजन कीटकांविरुद्ध सहक्रियात्मक किंवा विरोधी परस्परसंवाद प्रदर्शित करू शकतात. एडिस डासांद्वारे होणाऱ्या रोगांचा जलद प्रसार आणि पारंपारिक कीटकनाशकांना एडिस डासांच्या संख्येचा वाढता प्रतिकार लक्षात घेता, वनस्पती आवश्यक तेलांवर आधारित टर्पीन संयुगांचे अठ्ठावीस संयोजन तयार केले गेले आणि एडिस इजिप्तीच्या अळ्या आणि प्रौढ अवस्थांविरुद्ध चाचणी केली गेली. सुरुवातीला पाच वनस्पती आवश्यक तेले (EOs) त्यांच्या अळ्यानाशक आणि प्रौढ-वापराच्या प्रभावीतेसाठी मूल्यांकन केले गेले आणि GC-MS निकालांवर आधारित प्रत्येक EO मध्ये दोन प्रमुख संयुगे ओळखली गेली. मुख्य ओळखले जाणारे संयुगे खरेदी केले गेले, म्हणजे डायलिल डायसल्फाइड, डायलिल ट्रायसल्फाइड, कार्व्होन, लिमोनेन, युजेनॉल, मिथाइल युजेनॉल, युकेलिप्टोल, युडेसमोल आणि डास अल्फा-पाइनेन. नंतर या संयुगांचे बायनरी संयोजन सबलेथल डोस वापरून तयार केले गेले आणि त्यांचे सहक्रियात्मक आणि विरोधी प्रभाव तपासले गेले आणि निश्चित केले गेले. डायलिल डायसल्फाइडसह लिमोनिन मिसळून सर्वोत्तम लार्व्हिसाइडल रचना मिळवल्या जातात आणि कार्व्होन आणि लिमोनिन मिसळून सर्वोत्तम प्रौढ नाशाइडल रचना मिळवल्या जातात. व्यावसायिकरित्या वापरल्या जाणाऱ्या सिंथेटिक लार्व्हिसाइड टेम्फोस आणि प्रौढांसाठी वापरल्या जाणाऱ्या औषध मॅलेथिऑनची स्वतंत्रपणे आणि टर्पेनॉइड्ससह बायनरी संयोजनात चाचणी घेण्यात आली. निकालांवरून असे दिसून आले की टेमेफोस आणि डायलिल डायसल्फाइड आणि मॅलेथिऑन आणि युडेस्मोल यांचे संयोजन सर्वात प्रभावी होते. या शक्तिशाली संयुगांमध्ये एडीस इजिप्ती विरुद्ध वापरण्याची क्षमता आहे.
वनस्पती आवश्यक तेले (EOs) ही विविध जैव-सक्रिय संयुगे असलेले दुय्यम चयापचय आहेत आणि कृत्रिम कीटकनाशकांना पर्याय म्हणून ते अधिकाधिक महत्त्वाचे होत आहेत. ते केवळ पर्यावरणपूरक आणि वापरण्यास अनुकूल नाहीत तर ते वेगवेगळ्या जैव-सक्रिय संयुगांचे मिश्रण देखील आहेत, ज्यामुळे औषध प्रतिरोधकता विकसित होण्याची शक्यता देखील कमी होते1. GC-MS तंत्रज्ञानाचा वापर करून, संशोधकांनी विविध वनस्पती आवश्यक तेलांच्या घटकांचे परीक्षण केले आणि 17,500 सुगंधी वनस्पतींमधून 3,000 हून अधिक संयुगे ओळखली, ज्यापैकी बहुतेकांची कीटकनाशक गुणधर्मांसाठी चाचणी केली गेली आणि त्यांचे कीटकनाशक प्रभाव असल्याचे नोंदवले गेले आहे3,4. काही अभ्यासांवरून असे दिसून येते की संयुगाच्या मुख्य घटकाची विषाक्तता त्याच्या कच्च्या इथिलीन ऑक्साईडइतकीच किंवा त्यापेक्षा जास्त आहे. परंतु वैयक्तिक संयुगांचा वापर पुन्हा प्रतिकार विकसित करण्यासाठी जागा सोडू शकतो, जसे रासायनिक कीटकनाशकांच्या बाबतीत आहे5,6. म्हणून, सध्याचे लक्ष कीटकनाशक प्रभावीपणा सुधारण्यासाठी आणि लक्ष्यित कीटकांच्या लोकसंख्येमध्ये प्रतिकार होण्याची शक्यता कमी करण्यासाठी इथिलीन ऑक्साईड-आधारित संयुगांचे मिश्रण तयार करण्यावर आहे. EO मध्ये उपस्थित असलेले वैयक्तिक सक्रिय संयुगे EO च्या एकूण क्रियाकलापांना प्रतिबिंबित करणारे संयोजनांमध्ये सहक्रियात्मक किंवा विरोधी प्रभाव प्रदर्शित करू शकतात, ही वस्तुस्थिती मागील संशोधकांनी केलेल्या अभ्यासांमध्ये चांगलीच अधोरेखित केली गेली आहे7,8. वेक्टर नियंत्रण कार्यक्रमात EO आणि त्याचे घटक देखील समाविष्ट आहेत. क्युलेक्स आणि अ‍ॅनोफिलीस डासांवर आवश्यक तेलांच्या डासनाशक क्रियाकलापांचा विस्तृत अभ्यास केला गेला आहे. एकूण विषारीपणा वाढवण्यासाठी आणि दुष्परिणाम कमी करण्यासाठी विविध वनस्पतींना व्यावसायिकरित्या वापरल्या जाणाऱ्या कृत्रिम कीटकनाशकांसह एकत्रित करून प्रभावी कीटकनाशके विकसित करण्याचा अनेक अभ्यासांनी प्रयत्न केला आहे9. परंतु एडिस इजिप्ती विरुद्ध अशा संयुगांचा अभ्यास दुर्मिळ आहे. वैद्यकीय शास्त्रातील प्रगती आणि औषधे आणि लसींच्या विकासामुळे काही वेक्टर-जनित रोगांचा सामना करण्यास मदत झाली आहे. परंतु एडिस इजिप्ती डासांद्वारे प्रसारित होणाऱ्या विषाणूच्या वेगवेगळ्या सेरोटाइप्सच्या उपस्थितीमुळे लसीकरण कार्यक्रम अयशस्वी झाले आहेत. म्हणून, जेव्हा असे रोग होतात तेव्हा वेक्टर नियंत्रण कार्यक्रम हा रोगाचा प्रसार रोखण्यासाठी एकमेव पर्याय असतो. सध्याच्या परिस्थितीत, एडीस इजिप्तीवर नियंत्रण ठेवणे खूप महत्वाचे आहे कारण ते विविध विषाणूंचा आणि त्यांच्या सेरोटाइप्सचा एक प्रमुख वाहक आहे ज्यामुळे डेंग्यू ताप, झिका, डेंग्यू रक्तस्त्राव ताप, पिवळा ताप इत्यादी होतात. सर्वात लक्षणीय गोष्ट म्हणजे जवळजवळ सर्व वेक्टर-जनित एडीस-जनित रोगांच्या प्रकरणांची संख्या दरवर्षी इजिप्तमध्ये वाढत आहे आणि जगभरात वाढत आहे. म्हणूनच, या संदर्भात, एडीस इजिप्ती लोकसंख्येसाठी पर्यावरणपूरक आणि प्रभावी नियंत्रण उपाय विकसित करण्याची तातडीची गरज आहे. या संदर्भात संभाव्य उमेदवार म्हणजे EOs, त्यांचे घटक संयुगे आणि त्यांचे संयोजन. म्हणूनच, या अभ्यासात एडीस इजिप्ती विरुद्ध कीटकनाशक गुणधर्म असलेल्या पाच वनस्पतींमधील (म्हणजेच, पुदिना, पवित्र तुळस, निलगिरी ठिपकेदार, एलियम सल्फर आणि मेलेलुका) प्रमुख वनस्पती EO संयुगांचे प्रभावी सहक्रियात्मक संयोजन ओळखण्याचा प्रयत्न केला गेला.
सर्व निवडलेल्या EOs ने एडिस इजिप्ती विरुद्ध 0.42 ते 163.65 ppm पर्यंत 24-तास LC50 सह संभाव्य लार्व्हिसाइडल क्रियाकलाप दर्शविला. पेपरमिंट (Mp) EO साठी 24 तासांनी 0.42 ppm च्या LC50 मूल्यासह सर्वाधिक लार्व्हिसाइडल क्रियाकलाप नोंदवला गेला, त्यानंतर लसूण (As) चा क्रमांक लागतो ज्याचे LC50 मूल्य 24 तासांनी 16.19 ppm आहे (तक्ता 1).
Ocimum Saintum, Os EO वगळता, इतर सर्व चार स्क्रीन केलेल्या EO मध्ये स्पष्ट ऍलर्जीक प्रभाव दिसून आला, २४ तासांच्या एक्सपोजर कालावधीत LC50 मूल्ये २३.३७ ते १२०.१६ ppm पर्यंत होती. एक्सपोजरच्या २४ तासांच्या आत २३.३७ ppm च्या LC50 मूल्यासह प्रौढांना मारण्यात थायमोफिलस स्ट्रायटा (Cl) EO सर्वात प्रभावी होता, त्यानंतर युकॅलिप्टस मॅक्युलाटा (Em) ज्याचे LC50 मूल्य १०१.९१ ppm होते (तक्ता १). दुसरीकडे, Os साठी LC50 मूल्य अद्याप निश्चित केलेले नाही कारण सर्वोच्च डोसवर ५३% चा सर्वोच्च मृत्युदर नोंदवला गेला होता (पूरक आकृती ३).
प्रत्येक EO मधील दोन प्रमुख घटक संयुगे NIST लायब्ररी डेटाबेस निकाल, GC क्रोमॅटोग्राम क्षेत्र टक्केवारी आणि MS स्पेक्ट्रा निकालांच्या आधारे ओळखले गेले आणि निवडले गेले (तक्ता 2). EO As साठी, ओळखले जाणारे मुख्य संयुगे डायलिल डायसल्फाइड आणि डायलिल ट्रायसल्फाइड होते; EO Mp साठी ओळखले जाणारे मुख्य संयुगे कार्व्होन आणि लिमोनेन होते, EO Em साठी ओळखले जाणारे मुख्य संयुगे युडेस्मोल आणि युकलिप्टोल होते; EO Os साठी, ओळखले जाणारे मुख्य संयुगे युजेनॉल आणि मिथाइल युजेनॉल होते आणि EO Cl साठी, ओळखले जाणारे मुख्य संयुगे युजेनॉल आणि α-पिनिन होते (आकृती 1, पूरक आकृती 5-8, पूरक तक्ता 1-5).
निवडलेल्या आवश्यक तेलांच्या मुख्य टेरपेनॉइड्सच्या मास स्पेक्ट्रोमेट्रीचे निकाल (ए-डायलिल डायसल्फाइड; बी-डायलिल ट्रायसल्फाइड; सी-युजेनॉल; डी-मिथाइल युजेनॉल; ई-लिमोनेन; एफ-अरोमॅटिक सेपेरोन; जी-α-पिनेन; एच-सिनिओल; आर-युडेमॉल).
एकूण नऊ संयुगे (डायलिल डायसल्फाइड, डायलिल ट्रायसल्फाइड, युजेनॉल, मिथाइल युजेनॉल, कार्व्होन, लिमोनेन, युकेलिप्टोल, युडेसमोल, α-पिनेन) प्रभावी संयुगे म्हणून ओळखली गेली जी EO चे मुख्य घटक आहेत आणि लार्व्हल टप्प्यावर एडीस इजिप्ती विरुद्ध वैयक्तिकरित्या जैवपरीक्षण केले गेले. 24 तासांच्या संपर्कानंतर युडेसमोल या संयुगात सर्वाधिक लार्व्हिसाइडल क्रियाकलाप होता ज्याचे LC50 मूल्य 2.25 ppm होते. डायलिल डायसल्फाइड आणि डायलिल ट्रायसल्फाइड या संयुगांमध्ये संभाव्य लार्व्हिसाइडल प्रभाव असल्याचे देखील आढळून आले आहे, ज्यांचे सरासरी सबलेथल डोस 10-20 ppm च्या श्रेणीत आहेत. 63.35 ppm, 139.29 ppm च्या LC50 मूल्यांसह युजेनॉल, लिमोनेन आणि युकेलिप्टोल या संयुगांसाठी मध्यम लार्व्हिसाइडल क्रियाकलाप पुन्हा दिसून आला. आणि २४ तासांनंतर अनुक्रमे १८१.३३ पीपीएम (तक्ता ३). तथापि, सर्वाधिक डोसमध्येही मिथाइल युजेनॉल आणि कार्व्होनची कोणतीही लक्षणीय लार्व्हिसाइडल क्षमता आढळली नाही, म्हणून एलसी५० मूल्ये मोजली गेली नाहीत (तक्ता ३). २४ तासांच्या प्रदर्शनात एडीस एजिप्टी विरुद्ध टेमेफोस या कृत्रिम लार्व्हिसाइडची सरासरी प्राणघातक सांद्रता ०.४३ पीपीएम होती (तक्ता ३, पूरक तक्ता ६).
सात संयुगे (डायलिल डायसल्फाइड, डायलिल ट्रायसल्फाइड, युकलिप्टोल, α-पिनेन, युडेस्मोल, लिमोनेन आणि कार्व्होन) प्रभावी EO चे मुख्य संयुगे म्हणून ओळखले गेले आणि प्रौढ इजिप्शियन एडिस डासांविरुद्ध वैयक्तिकरित्या त्यांची चाचणी केली गेली. प्रोबिट रिग्रेशन विश्लेषणानुसार, युडेस्मोलमध्ये सर्वाधिक क्षमता असल्याचे आढळून आले ज्याचे LC50 मूल्य 1.82 ppm आहे, त्यानंतर युकेलिप्टोलचा LC50 मूल्य 17.60 ppm आहे. चाचणी केलेली उर्वरित पाच संयुगे LC50s असलेल्या प्रौढांसाठी 140.79 ते 737.01 ppm पर्यंत मध्यम प्रमाणात हानिकारक होती (तक्ता 3). सिंथेटिक ऑर्गनोफॉस्फरस मॅलेथिऑन युडेस्मोलपेक्षा कमी शक्तिशाली आणि इतर सहा संयुगांपेक्षा जास्त होती, 24-तासांच्या संपर्क कालावधीत LC50 मूल्य 5.44 ppm आहे (तक्ता 3, पूरक तक्ता 6).
त्यांच्या LC50 डोसचे बायनरी संयोजन 1:1 च्या प्रमाणात तयार करण्यासाठी सात शक्तिशाली शिसे संयुगे आणि ऑर्गेनोफॉस्फरस टेमफोसेट निवडले गेले. एडीस इजिप्ती विरुद्ध त्यांच्या लार्व्हायसिडल परिणामकारकतेसाठी एकूण 28 बायनरी संयोजन तयार केले गेले आणि त्यांची चाचणी केली गेली. नऊ संयोजने सहक्रियात्मक असल्याचे आढळले, 14 संयोजने विरोधी होती आणि पाच संयोजने लार्व्हायसिडल नव्हती. सहक्रियात्मक संयोजनांपैकी, डायलिल डायसल्फाइड आणि टेमोफोलचे संयोजन सर्वात प्रभावी होते, 24 तासांनंतर 100% मृत्युदर दिसून आला (तक्ता 4). त्याचप्रमाणे, डायलिल डायसल्फाइडसह लिमोनेन आणि थायमेटफॉससह युजेनॉलच्या मिश्रणाने चांगली क्षमता दर्शविली आणि लार्व्हा मृत्युदर 98.3% (तक्ता 5) दिसून आला. उर्वरित ४ संयोजने, म्हणजे युडेस्मोल प्लस युकेलिप्टोल, युडेस्मोल प्लस लिमोनेन, युकेलिप्टोल प्लस अल्फा-पाइनेन, अल्फा-पाइनेन प्लस टेमेफोस, यांनी देखील लक्षणीय लार्व्हिसाइडल कार्यक्षमता दर्शविली, ज्यामध्ये मृत्युदर ९०% पेक्षा जास्त असल्याचे दिसून आले. अपेक्षित मृत्युदर ६०-७५% च्या जवळ आहे. (तक्ता ४). तथापि, α-पाइनेन किंवा युकेलिप्टससह लिमोनेनच्या संयोजनाने विरोधी प्रतिक्रिया दर्शविल्या. त्याचप्रमाणे, युजेनॉल किंवा युकेलिप्टस किंवा युडेस्मोल किंवा डायलिल ट्रायसल्फाइडसह टेमेफोसच्या मिश्रणाचे विरोधी परिणाम आढळून आले आहेत. त्याचप्रमाणे, डायलिल डायसल्फाइड आणि डायलिल ट्रायसल्फाइडचे संयोजन आणि युडेस्मोल किंवा युजेनॉलसह यापैकी कोणत्याही संयुगाचे संयोजन त्यांच्या लार्व्हिसाइडल कृतीमध्ये विरोधी आहेत. युजेनॉल किंवा α-पाइनेनसह युडेस्मोलच्या संयोजनाने देखील विरोधीता नोंदवली गेली आहे.
प्रौढांच्या आम्लीय क्रियेसाठी चाचणी केलेल्या सर्व २८ बायनरी मिश्रणांपैकी ७ संयोजने सहक्रियात्मक होती, ६ चा कोणताही परिणाम झाला नाही आणि १५ विरोधी होते. युडेसमोल आणि लिमोनेन आणि कार्व्होन यांचे मिश्रण इतर सहक्रियात्मक संयोजनांपेक्षा अधिक प्रभावी असल्याचे आढळून आले, मृत्युदर २४ तास अनुक्रमे ७६% आणि १००% होता (तक्ता ५). मॅलेथिऑनमध्ये लिमोनेन आणि डायलिल ट्रायसल्फाइड वगळता सर्व संयुगांच्या संयोजनांसह सहक्रियात्मक प्रभाव दिसून आला आहे. दुसरीकडे, डायलिल डायसल्फाइड आणि डायलिल ट्रायसल्फाइड आणि त्या दोघांपैकी एकाचे युकेलिप्टोल, किंवा युकेलिप्टोल, किंवा कार्व्होन, किंवा लिमोनेन यांच्या संयोजनात विरोध आढळून आला आहे. त्याचप्रमाणे, α-पिनेन आणि युडेसमोल किंवा लिमोनेन, युकेलिप्टोल आणि कार्व्होन किंवा लिमोनेन यांच्या संयोजनात विरोधी लार्व्हिसिडल प्रभाव दिसून आला. उर्वरित सहा संयोजनांसाठी, अपेक्षित आणि निरीक्षण केलेल्या मृत्युदरात कोणताही महत्त्वपूर्ण फरक नव्हता (तक्ता 5).
सहक्रियात्मक परिणाम आणि सबलेथल डोसच्या आधारावर, मोठ्या संख्येने एडिस एजिप्टी डासांविरुद्ध त्यांची लार्व्हिसाइडल विषाक्तता शेवटी निवडण्यात आली आणि पुढील चाचणी करण्यात आली. निकालांवरून असे दिसून आले की युजेनॉल-लिमोनेन, डायलिल डायसल्फाइड-लिमोनेन आणि डायलिल डायसल्फाइड-टाइमफॉस या बायनरी संयोजनांचा वापर करून पाहिलेले लार्व्हा मृत्युदर १००% होते, तर अपेक्षित लार्व्हा मृत्युदर अनुक्रमे ७६.४८%, ७२.१६% आणि ६३.४% होता (तक्ता ६). लिमोनेन आणि युडेस्मोलचे संयोजन तुलनेने कमी प्रभावी होते, २४ तासांच्या एक्सपोजर कालावधीत ८८% लार्व्हा मृत्युदर दिसून आला (तक्ता ६). थोडक्यात, निवडलेल्या चार बायनरी संयोजनांनी मोठ्या प्रमाणात लागू केल्यावर एडिस एजिप्टीविरुद्ध सहक्रियात्मक लार्व्हिसाइडल प्रभाव देखील दर्शविला (तक्ता ६).
प्रौढ एडीस इजिप्तीच्या मोठ्या लोकसंख्येवर नियंत्रण ठेवण्यासाठी अॅडल्टोसिडल बायोअसेसाठी तीन सिनर्जिस्टिक संयोजन निवडले गेले. मोठ्या कीटक वसाहतींवर चाचणी करण्यासाठी संयोजन निवडण्यासाठी, आम्ही प्रथम दोन सर्वोत्तम सिनर्जिस्टिक टेरपीन संयोजनांवर लक्ष केंद्रित केले, म्हणजे कार्व्होन प्लस लिमोनेन आणि युकेलिप्टोल प्लस युडेसमोल. दुसरे म्हणजे, सिंथेटिक ऑर्गनोफॉस्फेट मॅलेथिऑन आणि टेरपेनोइड्सच्या संयोजनातून सर्वोत्तम सिनर्जिस्टिक संयोजन निवडले गेले. आमचा असा विश्वास आहे की मॅलेथिऑन आणि युडेसमोलचे संयोजन मोठ्या कीटक वसाहतींवर चाचणीसाठी सर्वोत्तम संयोजन आहे कारण त्यात सर्वाधिक मृत्युदर आणि उमेदवार घटकांचे LC50 मूल्य खूप कमी आहे. मॅलेथिऑन α-पिनिन, डायलिल डायसल्फाइड, युकेलिप्टस, कार्व्होन आणि युडेसमोल यांच्या संयोजनात सिनर्जिझम प्रदर्शित करते. परंतु जर आपण LC50 मूल्यांकडे पाहिले तर युडेसमोलचे मूल्य सर्वात कमी (2.25 पीपीएम) आहे. मॅलेथिऑन, α-पाइनीन, डायलिल डायसल्फाइड, युकेलिप्टोल आणि कार्व्होनची गणना केलेली LC50 मूल्ये अनुक्रमे 5.4, 716.55, 166.02, 17.6 आणि 140.79 पीपीएम होती. ही मूल्ये दर्शवितात की मॅलेथिऑन आणि युडेस्मोलचे संयोजन डोसच्या बाबतीत इष्टतम संयोजन आहे. निकालांवरून असे दिसून आले की कार्व्होन प्लस लिमोनेन आणि युडेस्मोल प्लस मॅलेथिऑनच्या संयोजनात 100% मृत्यूदर दिसून आला, तर अपेक्षित मृत्युदर 61% ते 65% होता. दुसरे संयोजन, युडेस्मोल प्लस युकेलिप्टोल, 24 तासांच्या संपर्कात आल्यानंतर मृत्युदर 78.66% दर्शवितो, तर अपेक्षित मृत्युदर 60% होता. प्रौढ एडिस इजिप्ती विरुद्ध मोठ्या प्रमाणात लागू केले तरीही निवडलेल्या तिन्ही संयोजनांनी सहक्रियात्मक प्रभाव दर्शविला (तक्ता 6).
या अभ्यासात, निवडक वनस्पती EOs जसे की Mp, As, Os, Em आणि Cl ने एडिस इजिप्तीच्या अळ्या आणि प्रौढ अवस्थांवर आशादायक घातक परिणाम दर्शविले. Mp EO मध्ये सर्वाधिक अळ्यानाशक क्रियाकलाप होता ज्याचे LC50 मूल्य 0.42 ppm होते, त्यानंतर As, Os आणि Em EOs मध्ये LC50 मूल्य 24 तासांनंतर 50 ppm पेक्षा कमी होते. हे निकाल डास आणि इतर डिप्टेरस माशांच्या मागील अभ्यासांशी सुसंगत आहेत10,11,12,13,14. Cl ची अळ्यानाशक क्षमता इतर आवश्यक तेलांपेक्षा कमी असली तरी, 24 तासांनंतर LC50 मूल्य 163.65 ppm असले तरी, त्याची प्रौढ क्षमता 24 तासांनंतर LC50 मूल्य 23.37 ppm सह सर्वाधिक आहे. एमपी, एएस आणि एएम ईओजनी २४ तासांच्या संपर्कात असताना १००-१२० पीपीएमच्या श्रेणीत एलसी५० मूल्यांसह चांगली अ‍ॅलर्जीक क्षमता दर्शविली, परंतु त्यांच्या लार्व्हायडल परिणामकारकतेपेक्षा तुलनेने कमी होती. दुसरीकडे, ईओ ओजने सर्वोच्च उपचारात्मक डोसमध्ये देखील नगण्य अ‍ॅलर्जीक प्रभाव दर्शविला. अशाप्रकारे, निकालांवरून असे दिसून येते की डासांच्या विकासाच्या टप्प्यावर अवलंबून वनस्पतींमध्ये इथिलीन ऑक्साईडची विषाक्तता बदलू शकते१५. हे कीटकांच्या शरीरात ईओजच्या प्रवेशाचा दर, विशिष्ट लक्ष्य एंजाइमशी त्यांचा संवाद आणि प्रत्येक विकासाच्या टप्प्यावर डासांच्या डिटॉक्सिफिकेशन क्षमतेवर देखील अवलंबून असते१६. मोठ्या संख्येने अभ्यासातून असे दिसून आले आहे की मुख्य घटक संयुग इथिलीन ऑक्साईडच्या जैविक क्रियाकलापांमध्ये एक महत्त्वाचा घटक आहे, कारण ते एकूण संयुगांपैकी बहुतेक भाग बनवते३,१२,१७,१८. म्हणून, आम्ही प्रत्येक ईओमध्ये दोन मुख्य संयुगे विचारात घेतली. GC-MS निकालांवर आधारित, डायलिल डायसल्फाइड आणि डायलिल ट्रायसल्फाइड हे EO As चे प्रमुख संयुगे म्हणून ओळखले गेले, जे मागील अहवालांशी सुसंगत आहे19,20,21. जरी मागील अहवालांमध्ये मेन्थॉल त्याच्या मुख्य संयुगांपैकी एक असल्याचे सूचित केले गेले असले तरी, कार्व्होन आणि लिमोनेन पुन्हा Mp EO22,23 चे मुख्य संयुगे म्हणून ओळखले गेले. Os EO च्या रचना प्रोफाइलमध्ये असे दिसून आले की युजेनॉल आणि मिथाइल युजेनॉल हे मुख्य संयुगे आहेत, जे पूर्वीच्या संशोधकांच्या निष्कर्षांसारखेच आहे16,24. एम लीफ ऑइलमध्ये युकेलिप्टोल आणि युकेलिप्टोल हे मुख्य संयुगे म्हणून नोंदवले गेले आहेत, जे काही संशोधकांच्या निष्कर्षांशी सुसंगत आहे25,26 परंतु ओलालेड आणि इतरांच्या निष्कर्षांच्या विरुद्ध आहे.27. मेलेलुका आवश्यक तेलात सिनेओल आणि α-पिनिनचे वर्चस्व दिसून आले, जे मागील अभ्यासांसारखेच आहे28,29. वेगवेगळ्या ठिकाणी एकाच वनस्पती प्रजातींमधून काढलेल्या आवश्यक तेलांच्या रचनेत आणि एकाग्रतेमध्ये अंतर्विशिष्ट फरक नोंदवले गेले आहेत आणि या अभ्यासात ते देखील पाहिले गेले आहेत, जे भौगोलिक वनस्पती वाढीच्या परिस्थिती, कापणीचा वेळ, विकासाचा टप्पा किंवा वनस्पती वयामुळे प्रभावित होतात. केमोटाइप्सचा देखावा इ.22,30,31,32. त्यानंतर ओळखले जाणारे प्रमुख संयुगे खरेदी केले गेले आणि त्यांचे लार्व्हासिडल प्रभाव आणि प्रौढ एडिस एजिप्टी डासांवर होणारे परिणाम तपासले गेले. निकालांवरून असे दिसून आले की डायलिल डायसल्फाइडची लार्व्हासिडल क्रिया क्रूड EO As च्या तुलनेत होती. परंतु डायलिल ट्रायसल्फाइडची क्रिया EO As पेक्षा जास्त आहे. हे निकाल क्युलेक्स फिलीपिन्सवर किम्बारिस एट अल. 33 ने मिळवलेल्या निकालांसारखेच आहेत. तथापि, या दोन संयुगांनी लक्ष्य डासांविरुद्ध चांगली ऑटोसाइडल क्रिया दर्शविली नाही, जी टेनेब्रिओ मोलिटरवरील प्लाटा-रुएडा एट अल 34 च्या निकालांशी सुसंगत आहे. ओएस ईओ एडिस एजिप्टीच्या लार्व्हा स्टेजविरुद्ध प्रभावी आहे, परंतु प्रौढ स्टेजविरुद्ध नाही. मुख्य वैयक्तिक संयुगांची लार्व्हिसाइडल क्रिया क्रूड ओएस ईओ पेक्षा कमी आहे हे स्थापित झाले आहे. याचा अर्थ इतर संयुगांची भूमिका आणि क्रूड इथिलीन ऑक्साईडमध्ये त्यांच्या परस्परसंवादाचा अर्थ होतो. मिथाइल युजेनॉलमध्येच नगण्य क्रिया असते, तर युजेनॉलमध्येच मध्यम लार्व्हिसाइडल क्रिया असते. हा निष्कर्ष एकीकडे, 35,36 याची पुष्टी करतो आणि दुसरीकडे, पूर्वीच्या संशोधकांच्या निष्कर्षांच्या विरोधात आहे37,38. युजेनॉल आणि मिथाइल्युजेनॉलच्या कार्यात्मक गटांमधील फरकांमुळे एकाच लक्ष्यित कीटकांना वेगवेगळी विषारीता निर्माण होऊ शकते39. लिमोनेनमध्ये मध्यम लार्व्हिसाइडल क्रिया आढळून आली, तर कार्व्होनचा प्रभाव नगण्य होता. त्याचप्रमाणे, प्रौढ कीटकांना लिमोनेनची तुलनेने कमी विषारीता आणि कार्व्होनची उच्च विषारीता मागील काही अभ्यासांच्या निकालांना समर्थन देते40 परंतु इतरांच्या विरोधात आहे41. इंट्रासायक्लिक आणि एक्सोसायक्लिक दोन्ही स्थितीत दुहेरी बंधांची उपस्थिती लार्व्हिसाइड्स म्हणून या संयुगांचे फायदे वाढवू शकते3,41, तर कार्व्होन, जो असंतृप्त अल्फा आणि बीटा कार्बनसह केटोन आहे, प्रौढांमध्ये विषारीपणाची उच्च क्षमता प्रदर्शित करू शकतो42. तथापि, लिमोनेन आणि कार्व्होनची वैयक्तिक वैशिष्ट्ये एकूण EO Mp पेक्षा खूपच कमी आहेत (तक्ता 1, तक्ता 3). चाचणी केलेल्या टेरपेनॉइड्समध्ये, युडेस्मॉलमध्ये 2.5 ppm पेक्षा कमी LC50 मूल्यासह सर्वात जास्त लार्व्हिसाइडल आणि प्रौढ क्रियाकलाप असल्याचे आढळून आले, ज्यामुळे ते एडीस डासांच्या नियंत्रणासाठी एक आशादायक संयुग बनले. त्याची कार्यक्षमता संपूर्ण EO Em पेक्षा चांगली आहे, जरी हे चेंग एट अल.40 च्या निष्कर्षांशी सुसंगत नाही. युडेस्मॉल हे दोन आयसोप्रीन युनिट्स असलेले सेस्क्विटरपीन आहे जे निलगिरीसारख्या ऑक्सिजनयुक्त मोनोटर्पीन्सपेक्षा कमी अस्थिर आहे आणि म्हणून कीटकनाशक म्हणून जास्त क्षमता आहे. युकॅलिप्टोलमध्ये प्रौढांपेक्षा लार्व्हिसाइडल क्रियाकलाप जास्त असतो आणि पूर्वीच्या अभ्यासांचे निकाल याला समर्थन आणि खंडन दोन्ही देतात37,43,44. केवळ ही क्रिया जवळजवळ संपूर्ण EO Cl च्या तुलनेत तुलनात्मक आहे. आणखी एक सायकलिक मोनोटेरपीन, α-पिनेन, लार्व्हिसाइडल प्रभावापेक्षा एडीस एजिप्टीवर प्रौढ प्रभाव कमी असतो, जो पूर्ण EO Cl च्या प्रभावाच्या विरुद्ध असतो. टेरपेनॉइड्सची एकूण कीटकनाशक क्रिया त्यांच्या लिपोफिलिसिटी, अस्थिरता, कार्बन ब्रांचिंग, प्रोजेक्शन क्षेत्र, पृष्ठभाग क्षेत्र, कार्यात्मक गट आणि त्यांच्या स्थानांवरून प्रभावित होते45,46. ही संयुगे पेशी संचय नष्ट करून, श्वसन क्रियाकलाप अवरोधित करून, मज्जातंतूंच्या आवेगांच्या प्रसारणामध्ये व्यत्यय आणून इत्यादी कार्य करू शकतात. 47 सिंथेटिक ऑर्गनोफॉस्फेट टेमेफॉसमध्ये 0.43 पीपीएमच्या LC50 मूल्यासह सर्वाधिक लार्व्हिसाइडल क्रियाकलाप असल्याचे आढळून आले, जे लेकच्या डेटा -उटाला48 शी सुसंगत आहे. कृत्रिम ऑर्गेनोफॉस्फरस मॅलेथिऑनची प्रौढ क्रिया 5.44 पीपीएम नोंदवली गेली. जरी या दोन्ही ऑर्गेनोफॉस्फेट्सनी एडीस इजिप्तीच्या प्रयोगशाळेतील जातींविरुद्ध अनुकूल प्रतिसाद दर्शविला असला तरी, जगाच्या वेगवेगळ्या भागांमध्ये या संयुगांना डासांचा प्रतिकार नोंदवला गेला आहे49. तथापि, हर्बल औषधांना प्रतिकार विकसित झाल्याचे कोणतेही समान अहवाल आढळले नाहीत50. अशाप्रकारे, वेक्टर नियंत्रण कार्यक्रमांमध्ये वनस्पतिजन्य पदार्थांना रासायनिक कीटकनाशकांचे संभाव्य पर्याय मानले जातात.
थायमेटफॉससह शक्तिशाली टेरपेनॉइड्स आणि टेरपेनॉइड्सपासून तयार केलेल्या २८ बायनरी संयोजनांवर (१:१) लार्व्हिसाइडल प्रभावाची चाचणी घेण्यात आली आणि ९ संयोजने सहक्रियात्मक, १४ विरोधी आणि ५ विरोधी असल्याचे आढळले. कोणताही परिणाम झाला नाही. दुसरीकडे, प्रौढ पॉटेंसी बायोअसेमध्ये, ७ संयोजने सहक्रियात्मक, १५ संयोजने विरोधी आणि ६ संयोजनांचा कोणताही परिणाम झाला नाही असे आढळून आले. काही संयोजने सहक्रियात्मक परिणाम निर्माण करण्याचे कारण वेगवेगळ्या महत्त्वाच्या मार्गांमध्ये एकाच वेळी संवाद साधणारे उमेदवार संयुगे किंवा विशिष्ट जैविक मार्गाच्या वेगवेगळ्या प्रमुख एंजाइम्सच्या अनुक्रमिक प्रतिबंधामुळे असू शकते. डायलिल डायसल्फाइड, युकलिप्टस किंवा युजेनॉलसह लिमोनेनचे संयोजन लहान आणि मोठ्या प्रमाणात अनुप्रयोगांमध्ये सहक्रियात्मक असल्याचे आढळले (तक्ता ६), तर युकलिप्टस किंवा α-पाइनेनसह त्याचे संयोजन अळ्यांवर विरोधी प्रभाव असल्याचे आढळून आले. सरासरी, लिमोनिन एक चांगला सहक्रिया करणारा असल्याचे दिसून येते, कदाचित मिथाइल गटांच्या उपस्थितीमुळे, स्ट्रॅटम कॉर्नियममध्ये चांगले प्रवेश आणि कृतीची वेगळी यंत्रणा52,53. पूर्वी असे नोंदवले गेले आहे की लिमोनिन कीटकांच्या क्यूटिकल्समध्ये प्रवेश करून (संपर्क विषाक्तता), पाचन तंत्रावर परिणाम करून (अँटीफीडंट) किंवा श्वसन प्रणालीवर परिणाम करून (धूर क्रियाकलाप) विषारी परिणाम करू शकते, 54 तर युजेनॉल सारख्या फेनिलप्रोपॅनॉइड्स चयापचय एंजाइमवर परिणाम करू शकतात 55. म्हणून, कृतीच्या वेगवेगळ्या यंत्रणा असलेल्या संयुगांचे संयोजन मिश्रणाचा एकूण प्राणघातक परिणाम वाढवू शकते. युकेलिप्टोल डायलिल डायसल्फाइड, युकेलिप्टस किंवा α-पिनेनसह सहक्रियात्मक असल्याचे आढळून आले, परंतु इतर संयुगांसह इतर संयोजन एकतर गैर-लार्व्हिसाइडल किंवा विरोधी होते. सुरुवातीच्या अभ्यासातून असे दिसून आले की युकेलिप्टोलमध्ये एसिटाइलकोलिनेस्टेरेस (AChE), तसेच ऑक्टामाइन आणि GABA रिसेप्टर्सवर प्रतिबंधात्मक क्रियाकलाप आहे56. चक्रीय मोनोटर्पेन्स, युकलिप्टोल, युजेनॉल इत्यादींची कृती करण्याची यंत्रणा त्यांच्या न्यूरोटॉक्सिक क्रियाकलापांसारखीच असू शकते, 57 ज्यामुळे परस्पर प्रतिबंधाद्वारे त्यांचे एकत्रित परिणाम कमी होतात. त्याचप्रमाणे, टेमेफोसचे डायलिल डायसल्फाइड, α-पिनेन आणि लिमोनेनसह संयोजन सहक्रियात्मक असल्याचे आढळून आले, जे हर्बल उत्पादने आणि कृत्रिम ऑर्गनोफॉस्फेट्समधील सहक्रियात्मक परिणामाच्या मागील अहवालांना समर्थन देते58.
युडेसमोल आणि युकेलिप्टोलच्या संयोजनाचा एडिस इजिप्तीच्या अळ्या आणि प्रौढ अवस्थांवर एक सहक्रियात्मक प्रभाव असल्याचे आढळून आले, कदाचित त्यांच्या वेगवेगळ्या रासायनिक रचनांमुळे त्यांच्या कृतीच्या वेगवेगळ्या पद्धतींमुळे. युडेसमोल (एक सेस्क्विटरपीन) श्वसन प्रणालीवर परिणाम करू शकते 59 आणि युकेलिप्टोल (एक मोनोटेरपीन) एसिटाइलकोलिनेस्टेरेस 60 वर परिणाम करू शकते. दोन किंवा अधिक लक्ष्यित ठिकाणी घटकांचे सह-प्रदर्शन संयोजनाचा एकूण घातक परिणाम वाढवू शकते. प्रौढ पदार्थांच्या बायोअसेमध्ये, मॅलेथिऑन कार्व्होन किंवा युकेलिप्टोल किंवा युकेलिप्टोल किंवा डायलिल डायसल्फाइड किंवा α-पिनेनसह सहक्रियात्मक असल्याचे आढळून आले, जे दर्शविते की ते लिमोनेन आणि डायच्या व्यतिरिक्त सहक्रियात्मक आहे. अ‍ॅलिल ट्रायसल्फाइड वगळता, टेरपीन संयुगांच्या संपूर्ण पोर्टफोलिओसाठी चांगले सहक्रियात्मक ऍलर्जीक उमेदवार. थँगम आणि कॅथिरेसन61 ने देखील हर्बल अर्कांसह मॅलेथिऑनच्या सहक्रियात्मक प्रभावाचे समान परिणाम नोंदवले. ही सहक्रियात्मक प्रतिक्रिया कदाचित कीटकांच्या विषारी पदार्थांना विषमुक्त करणाऱ्या एन्झाईम्सवर मॅलेथिऑन आणि फायटोकेमिकल्सच्या एकत्रित विषारी प्रभावामुळे असू शकते. मॅलेथिऑनसारखे ऑर्गेनोफॉस्फेट्स सामान्यतः सायटोक्रोम P450 एस्टेरेसेस आणि मोनोऑक्सिजनेसेस 62,63,64 प्रतिबंधित करून कार्य करतात. म्हणून, मॅलेथिऑनला या कृती यंत्रणेसह आणि टर्पेन्सला कृतीच्या वेगवेगळ्या यंत्रणेसह एकत्रित केल्याने डासांवर एकूण घातक परिणाम वाढू शकतो.
दुसरीकडे, विरोध दर्शवितो की निवडलेले संयुगे प्रत्येक संयुगापेक्षा संयोजनात कमी सक्रिय असतात. काही संयुगांमध्ये विरोधाचे कारण असे असू शकते की एक संयुग शोषण, वितरण, चयापचय किंवा उत्सर्जनाचा दर बदलून दुसऱ्या संयुगाचे वर्तन बदलते. सुरुवातीच्या संशोधकांनी हे औषध संयोजनात विरोधाचे कारण मानले. रेणू संभाव्य यंत्रणा 65. त्याचप्रमाणे, विरोधाची संभाव्य कारणे कृतीच्या समान यंत्रणा, समान रिसेप्टर किंवा लक्ष्य साइटसाठी घटक संयुगांच्या स्पर्धेशी संबंधित असू शकतात. काही प्रकरणांमध्ये, लक्ष्य प्रथिनांचे गैर-स्पर्धात्मक प्रतिबंध देखील होऊ शकतात. या अभ्यासात, दोन ऑर्गनोसल्फर संयुगे, डायलिल डायसल्फाइड आणि डायलिल ट्रायसल्फाइड, यांनी विरोधी प्रभाव दर्शविला, कदाचित त्याच लक्ष्य साइटसाठी स्पर्धेमुळे. त्याचप्रमाणे, या दोन सल्फर संयुगांनी विरोधी प्रभाव दर्शविला आणि युडेस्मोल आणि α-पिनेनसह एकत्रित केल्यावर कोणताही परिणाम झाला नाही. युडेस्मोल आणि अल्फा-पाइनेन हे चक्रीय स्वरूपाचे आहेत, तर डायलिल डायसल्फाइड आणि डायलिल ट्रायसल्फाइड हे अ‍ॅलिफॅटिक स्वरूपाचे आहेत. रासायनिक रचनेनुसार, या संयुगांच्या संयोजनामुळे एकूण प्राणघातक क्रियाकलाप वाढला पाहिजे कारण त्यांची लक्ष्यित ठिकाणे सहसा भिन्न असतात34,47, परंतु प्रायोगिकरित्या आम्हाला विरोध आढळला, जो परस्परसंवादाच्या परिणामी काही अज्ञात जीवांमध्ये या संयुगांच्या भूमिकेमुळे असू शकतो. त्याचप्रमाणे, सिनेओल आणि α-पाइनेनच्या संयोजनामुळे विरोधी प्रतिक्रिया निर्माण झाल्या, जरी संशोधकांनी पूर्वी नोंदवले होते की दोन्ही संयुगांमध्ये कृतीचे वेगवेगळे लक्ष्य आहेत47,60. दोन्ही संयुगे चक्रीय मोनोटेर्पेन्स असल्याने, काही सामान्य लक्ष्यित ठिकाणे असू शकतात जी बंधनासाठी स्पर्धा करू शकतात आणि अभ्यास केलेल्या संयोजन जोड्यांच्या एकूण विषारीपणावर प्रभाव टाकू शकतात.
LC50 मूल्ये आणि निरीक्षण केलेल्या मृत्युदराच्या आधारे, दोन सर्वोत्तम सिनर्जिस्टिक टर्पीन संयोजन निवडले गेले, म्हणजे कार्व्होन + लिमोनिन आणि युकलिप्टोल + युडेसमोल, तसेच टर्पेन्ससह सिंथेटिक ऑर्गनोफॉस्फरस मॅलेथिऑन. प्रौढ कीटकनाशक बायोअसेमध्ये मॅलेथिऑन + युडेसमोल संयुगांचे इष्टतम सिनर्जिस्टिक संयोजन तपासले गेले. तुलनेने मोठ्या प्रदर्शनाच्या जागांवर हे प्रभावी संयोजन मोठ्या संख्येने व्यक्तींविरुद्ध कार्य करू शकतात की नाही याची पुष्टी करण्यासाठी मोठ्या कीटक वसाहतींना लक्ष्य करा. हे सर्व संयोजन कीटकांच्या मोठ्या थवांविरुद्ध एक सिनर्जिस्टिक प्रभाव दर्शवितात. एडिस एजिप्टी अळ्यांच्या मोठ्या लोकसंख्येविरुद्ध चाचणी केलेल्या इष्टतम सिनर्जिस्टिक लार्व्हिसिडल संयोजनासाठी समान परिणाम प्राप्त झाले. अशाप्रकारे, असे म्हणता येईल की वनस्पती EO संयुगांचे प्रभावी सिनर्जिस्टिक लार्व्हिसिडल आणि प्रौढनाशिक संयोजन विद्यमान कृत्रिम रसायनांविरुद्ध एक मजबूत उमेदवार आहे आणि एडिस एजिप्टी लोकसंख्येवर नियंत्रण ठेवण्यासाठी त्याचा वापर केला जाऊ शकतो. त्याचप्रमाणे, डासांना देण्यात येणाऱ्या थायमेटफॉस किंवा मॅलेथिऑनच्या डोस कमी करण्यासाठी सिंथेटिक लार्व्हिसाइड्स किंवा अ‍ॅडल्टिसाइड्स आणि टर्पेन्सचे प्रभावी संयोजन देखील वापरले जाऊ शकते. एडिस डासांमध्ये औषध प्रतिकारशक्तीच्या उत्क्रांतीवरील भविष्यातील अभ्यासांसाठी हे शक्तिशाली सहक्रियात्मक संयोजन उपाय प्रदान करू शकतात.
एडिस इजिप्तीची अंडी डिब्रुगड येथील प्रादेशिक वैद्यकीय संशोधन केंद्र, इंडियन कौन्सिल ऑफ मेडिकल रिसर्च येथून गोळा करण्यात आली आणि गुवाहाटी विद्यापीठाच्या प्राणीशास्त्र विभागात नियंत्रित तापमान (२८ ± १ °C) आणि आर्द्रता (८५ ± ५%) खालील परिस्थितीत ठेवण्यात आली: अरिवोलीचे वर्णन केले आहे. अंडी बाहेर आल्यानंतर, अळ्यांना अळ्यांचे अन्न (कुत्र्याचे बिस्किट पावडर आणि यीस्ट ३:१ च्या प्रमाणात) दिले गेले आणि प्रौढांना १०% ग्लुकोजचे द्रावण दिले गेले. बाहेर पडल्यानंतर तिसऱ्या दिवसापासून, प्रौढ मादी डासांना अल्बिनो उंदरांचे रक्त शोषण्याची परवानगी देण्यात आली. फिल्टर पेपर एका ग्लास पाण्यात भिजवा आणि अंडी देणाऱ्या पिंजऱ्यात ठेवा.
निवडक वनस्पतींचे नमुने म्हणजे निलगिरीची पाने (मायर्टेसी), पवित्र तुळस (लॅमियासी), पुदिना (लॅमियासी), मेलेलुका (मायर्टेसी) आणि अ‍ॅलियम बल्ब (अ‍ॅमॅरिलिडासी). गुवाहाटी येथून गोळा केलेले आणि गौहाटी विद्यापीठाच्या वनस्पतिशास्त्र विभागाने ओळखले. गोळा केलेले वनस्पतींचे नमुने (५०० ग्रॅम) क्लीव्हेंजर उपकरण वापरून ६ तासांसाठी हायड्रोडिस्टिलेशन केले गेले. काढलेले ईओ स्वच्छ काचेच्या कुपींमध्ये गोळा केले गेले आणि पुढील अभ्यासासाठी ४°C वर साठवले गेले.
जागतिक आरोग्य संघटनेच्या मानक कार्यपद्धती 67 वापरून लार्व्हिसाइडल विषाक्ततेचा अभ्यास करण्यात आला. इमल्सीफायर म्हणून DMSO वापरा. ​​सुरुवातीला प्रत्येक EO एकाग्रतेची चाचणी 100 आणि 1000 ppm वर करण्यात आली, प्रत्येक प्रतिकृतीमध्ये 20 अळ्या उघड झाल्या. निकालांच्या आधारे, एकाग्रता श्रेणी लागू करण्यात आली आणि 1 तास ते 6 तास (1 तासाच्या अंतराने) आणि उपचारानंतर 24 तास, 48 तास आणि 72 तासांनी मृत्युदर नोंदवण्यात आला. 24, 48 आणि 72 तासांच्या संपर्कानंतर सबलेथल सांद्रता (LC50) निश्चित करण्यात आली. प्रत्येक एकाग्रतेचे तीन प्रतींमध्ये एक नकारात्मक नियंत्रण (फक्त पाणी) आणि एक सकारात्मक नियंत्रण (DMSO-प्रक्रिया केलेले पाणी) सह परीक्षण केले गेले. जर प्युपेशन झाले आणि नियंत्रण गटातील 10% पेक्षा जास्त अळ्या मरतात, तर प्रयोग पुन्हा केला जातो. जर नियंत्रण गटातील मृत्युदर 5-10% च्या दरम्यान असेल, तर अॅबॉट सुधारणा सूत्र 68 वापरा.
रमार आणि इतरांनी वर्णन केलेल्या पद्धतीचा वापर एडिस इजिप्ती विरुद्ध प्रौढ बायोअसेसाठी एसीटोनचा वापर करून केला गेला. सुरुवातीला प्रत्येक ईओची चाचणी प्रौढ एडिस इजिप्ती डासांवर १०० आणि १००० पीपीएमच्या सांद्रतेवर केली गेली. प्रत्येक तयार द्रावणाचे २ मिली व्हॉटमन नंबरवर लावा. फिल्टर पेपरचा १ तुकडा (१२ x १५ सेमी२ आकार) आणि एसीटोनला १० मिनिटे बाष्पीभवन होऊ द्या. फक्त २ मिली एसीटोनने प्रक्रिया केलेला फिल्टर पेपर नियंत्रण म्हणून वापरला गेला. एसीटोन बाष्पीभवन झाल्यानंतर, प्रक्रिया केलेला फिल्टर पेपर आणि नियंत्रण फिल्टर पेपर एका दंडगोलाकार नळीत (१० सेमी खोल) ठेवले जातात. ३ ते ४ दिवसांच्या रक्त न खाणाऱ्या दहा डासांना प्रत्येक एकाग्रतेच्या तीन प्रतींमध्ये स्थानांतरित करण्यात आले. प्राथमिक चाचण्यांच्या निकालांवर आधारित, निवडलेल्या तेलांच्या विविध सांद्रतेची चाचणी करण्यात आली. डास सोडल्यानंतर १ तास, २ तास, ३ तास, ४ तास, ५ तास, ६ तास, २४ तास, ४८ तास आणि ७२ तासांनी मृत्युदर नोंदवण्यात आला. २४ तास, ४८ तास आणि ७२ तासांच्या एक्सपोजर वेळेसाठी LC50 मूल्ये मोजा. जर नियंत्रण गटाचा मृत्युदर २०% पेक्षा जास्त असेल, तर संपूर्ण चाचणी पुन्हा करा. त्याचप्रमाणे, जर नियंत्रण गटातील मृत्युदर ५% पेक्षा जास्त असेल, तर अॅबॉटच्या सूत्राचा वापर करून उपचारित नमुन्यांसाठी निकाल समायोजित करा68.
निवडलेल्या आवश्यक तेलांच्या घटक संयुगांचे विश्लेषण करण्यासाठी गॅस क्रोमॅटोग्राफी (अ‍ॅजिलेंट ७८९०ए) आणि मास स्पेक्ट्रोमेट्री (अ‍ॅक्यू टीओएफ जीसीव्ही, जेओएल) करण्यात आली. जीसीमध्ये एफआयडी डिटेक्टर आणि केशिका स्तंभ (एचपी५-एमएस) सुसज्ज होता. वाहक वायू हेलियम होता, प्रवाह दर १ मिली/मिनिट होता. जीसी प्रोग्राममध्ये अ‍ॅलियम सॅटिव्हम १०:८०-१एम-८-२२०-५एम-८-२७०-९एम आणि ऑसिमम सेंटम १०:८०-३एम-८-२००-३एम-१०-२७५-१एम-५ – २८०, मिंट १०:८०-१एम-८-२००-५एम-८-२७५-१एम-५-२८०, निलगिरी २०.६०-१एम-१०-२००-३एम-३०-२८० आणि लाल रंगासाठी हजार थरांसाठी ते १०:६०-१एम-८-२२०-५एम-८-२७०-३एम असे सेट केले आहेत.
प्रत्येक EO चे प्रमुख संयुगे GC क्रोमॅटोग्राम आणि मास स्पेक्ट्रोमेट्री निकालांमधून (NIST 70 मानक डेटाबेसचा संदर्भ देऊन) मोजलेल्या क्षेत्रफळाच्या टक्केवारीच्या आधारे ओळखले गेले.
प्रत्येक EO मधील दोन प्रमुख संयुगे GC-MS निकालांच्या आधारे निवडण्यात आली आणि पुढील जैवअसेसाठी सिग्मा-अल्ड्रिचकडून 98-99% शुद्धतेवर खरेदी करण्यात आली. वर वर्णन केल्याप्रमाणे एडीस एजिप्टी विरुद्ध लार्व्हिसिडल आणि प्रौढांच्या प्रभावीतेसाठी या संयुगांची चाचणी घेण्यात आली. सर्वात सामान्यपणे वापरल्या जाणाऱ्या सिंथेटिक लार्व्हिसिडल टेमफोसेट (सिग्मा अल्ड्रिच) आणि प्रौढांसाठी मॅलेथिऑन (सिग्मा अल्ड्रिच) यांचे विश्लेषण करून निवडलेल्या EO संयुगांशी त्यांची प्रभावीता तुलना केली गेली, त्याच प्रक्रियेचा अवलंब केला गेला.
निवडलेल्या टर्पीन संयुगे आणि टर्पीन संयुगे आणि व्यावसायिक ऑर्गेनोफॉस्फेट्स (टायलफॉस आणि मॅलेथिऑन) यांचे बायनरी मिश्रण प्रत्येक उमेदवार संयुगाच्या LC50 डोसचे 1:1 प्रमाणात मिश्रण करून तयार केले गेले. वर वर्णन केल्याप्रमाणे तयार केलेल्या संयोजनांची चाचणी एडीस इजिप्तीच्या लार्वा आणि प्रौढ टप्प्यांवर करण्यात आली. प्रत्येक जैवपरीक्षण प्रत्येक संयोजनासाठी तीन प्रतींमध्ये आणि प्रत्येक संयोजनात उपस्थित असलेल्या वैयक्तिक संयुगांसाठी तीन प्रतींमध्ये करण्यात आले. लक्ष्यित कीटकांचा मृत्यू 24 तासांनंतर नोंदवण्यात आला. खालील सूत्र वापरून बायनरी मिश्रणासाठी अपेक्षित मृत्युदर मोजा.
जिथे E = बायनरी संयोजनाच्या प्रतिसादात एडीस इजिप्ती डासांचा अपेक्षित मृत्युदर, म्हणजेच कनेक्शन (A + B).
पावला52 ने वर्णन केलेल्या पद्धतीद्वारे गणना केलेल्या χ2 मूल्याच्या आधारे प्रत्येक बायनरी मिश्रणाचा परिणाम सहक्रियात्मक, विरोधी किंवा कोणताही परिणाम नाही असे लेबल केले गेले. खालील सूत्र वापरून प्रत्येक संयोजनासाठी χ2 मूल्याची गणना करा.
जेव्हा गणना केलेले χ2 मूल्य संबंधित स्वातंत्र्य अंशांसाठी (95% आत्मविश्वास मध्यांतर) सारणी मूल्यापेक्षा जास्त होते आणि जर निरीक्षण केलेले मृत्युदर अपेक्षित मृत्युदरापेक्षा जास्त आढळले तर संयोजनाचा परिणाम synergistic म्हणून परिभाषित केला गेला. त्याचप्रमाणे, जर कोणत्याही संयोजनासाठी गणना केलेले χ2 मूल्य काही स्वातंत्र्य अंशांसह सारणी मूल्यापेक्षा जास्त असेल, परंतु निरीक्षण केलेले मृत्युदर अपेक्षित मृत्युदरापेक्षा कमी असेल, तर उपचार विरोधी मानले जातात. आणि जर कोणत्याही संयोजनात χ2 चे गणना केलेले मूल्य संबंधित स्वातंत्र्य अंशांमध्ये सारणी मूल्यापेक्षा कमी असेल, तर संयोजनाचा कोणताही परिणाम होत नाही असे मानले जाते.
मोठ्या संख्येने कीटकांविरुद्ध चाचणीसाठी तीन ते चार संभाव्य सहक्रियात्मक संयोजने (१०० अळ्या आणि ५० अळ्यानाशक आणि प्रौढ कीटक क्रियाकलाप) निवडली गेली. प्रौढ) वरीलप्रमाणे पुढे जातात. मिश्रणांसोबत, निवडलेल्या मिश्रणांमध्ये उपस्थित असलेल्या वैयक्तिक संयुगांची देखील समान संख्येने एडीस इजिप्ती अळ्या आणि प्रौढांवर चाचणी केली गेली. संयोजन प्रमाण एका उमेदवार संयुगाच्या एक भाग LC50 डोस आणि दुसऱ्या घटक संयुगाच्या एक भाग LC50 डोस आहे. प्रौढ क्रियाकलाप बायोअसेमध्ये, निवडलेल्या संयुगे सॉल्व्हेंट एसीटोनमध्ये विरघळली गेली आणि १३०० सेमी३ दंडगोलाकार प्लास्टिक कंटेनरमध्ये गुंडाळलेल्या फिल्टर पेपरवर लावली गेली. एसीटोन १० मिनिटांसाठी बाष्पीभवन करण्यात आला आणि प्रौढांना सोडण्यात आले. त्याचप्रमाणे, लार्व्हिसिडल बायोअसेमध्ये, LC50 उमेदवार संयुगांचे डोस प्रथम DMSO च्या समान प्रमाणात विरघळले गेले आणि नंतर १३०० सीसी प्लास्टिक कंटेनरमध्ये साठवलेल्या १ लिटर पाण्यात मिसळले गेले आणि अळ्या सोडण्यात आल्या.
LC50 मूल्यांची गणना करण्यासाठी SPSS (आवृत्ती 16) आणि Minitab सॉफ्टवेअर वापरून 71 रेकॉर्ड केलेल्या मृत्युदर डेटाचे संभाव्य विश्लेषण केले गेले.