वनस्पती आणि रोगजनक साहित्य
इलिनॉय विद्यापीठात (आता UC डेव्हिस येथे) डॉ. पॅट ब्राउन यांनी ज्वारीचे रूपांतरण लोकसंख्या (SCP) म्हणून ओळखले जाणारे ज्वारी असोसिएशन मॅपिंग लोकसंख्या प्रदान केली होती.हे पूर्वी वर्णन केले गेले आहे आणि यूएस वातावरणात वनस्पतींची वाढ आणि विकास सुलभ करण्यासाठी फोटोपीरियड-संवेदनशीलता आणि लहान आकारात रूपांतरित केलेल्या विविध रेषांचा संग्रह आहे.या अभ्यासामध्ये या लोकसंख्येतील 510 ओळी वापरल्या गेल्या, जरी खराब उगवण आणि इतर गुणवत्ता नियंत्रण समस्यांमुळे, तिन्ही वैशिष्ट्यांच्या विश्लेषणामध्ये सर्व ओळी वापरल्या गेल्या नाहीत.शेवटी 345 ओळींमधील डेटा चिटिन प्रतिसादाच्या विश्लेषणासाठी, 472 ओळी flg22 प्रतिसादासाठी आणि 456 TLS प्रतिकारासाठी वापरण्यात आला.B. कुकीआर्कान्सा विद्यापीठातील डॉ. बर्ट ब्लह्म यांच्याकडून LSLP18 स्ट्रेन मिळवला गेला.
MAMP प्रतिसाद मापन
या अभ्यासात flg22, (Genscript catalog# RP19986), आणि chitin दोन भिन्न MAMP वापरण्यात आले.ज्वारीची रोपे ग्रीनहाऊसमध्ये मातीने भरलेल्या फ्लॅट्सवर (33% सनशाईन रेडी-अर्थ प्रो ग्रोइंग मिक्स) घालण्यात आली.संकलनाच्या दिवशी अतिरिक्त पानांचा ओलावा टाळण्यासाठी नमुना संकलनाच्या आदल्या दिवशी रोपांना पाणी दिले गेले.
ओळी यादृच्छिक केल्या गेल्या आणि, लॉजिस्टिक कारणास्तव, 60 ओळींच्या बॅचमध्ये लावल्या गेल्या.प्रत्येक ओळीसाठी प्रत्येक ओळीत दोन बिया टाकून तीन 'कुंड्या' लावल्या.संपूर्ण लोकसंख्येचे मूल्यमापन होईपर्यंत मागील बॅचवर प्रक्रिया केल्याबरोबरच त्यानंतरच्या बॅचची लागवड करण्यात आली.दोन्ही MAMP साठी दोन प्रायोगिक धावा आयोजित केल्या गेल्या ज्या दोन धावांपैकी प्रत्येकामध्ये जीनोटाइप पुन्हा यादृच्छिक केल्या गेल्या.
ROS assays पूर्वी वर्णन केल्याप्रमाणे केले गेले.थोडक्यात, प्रत्येक ओळीसाठी, सहा बिया 3 वेगवेगळ्या कुंड्यांमध्ये लावल्या गेल्या.परिणामी रोपांमधून, एकसमानतेवर आधारित तीन निवडले गेले.असामान्य दिसणारी किंवा लक्षणीयरीत्या उंच किंवा बहुसंख्यांपेक्षा लहान असलेली रोपे वापरली जात नाहीत.तीन वेगवेगळ्या 15 दिवस जुन्या ज्वारीच्या रोपांच्या चौथ्या पानाच्या रुंद भागातून 3 मिमी व्यासाच्या चार लीफ डिस्क्स काढल्या गेल्या.दोन वनस्पतींमधून प्रति पान एक चकती आणि एका रोपातून दोन चकती, दुसरी चकती पाण्याचे नियंत्रण बनते (खाली पहा).डिस्क्स एका काळ्या 96-वेल प्लेटमध्ये 50 μl H20 वर स्वतंत्रपणे तरंगल्या गेल्या, प्रकाशाचा संपर्क टाळण्यासाठी अॅल्युमिनियमच्या सीलने सीलबंद केले आणि रात्रभर खोलीच्या तपमानावर ठेवले.दुसऱ्या दिवशी सकाळी 2 mg/ml chemiluminescent probe L-012 (Wako, catalog # 120-04891), 2 mg/ml तिखट मूळ असलेले एक रोपटे पेरोक्सिडेस (प्रकार VI-A, सिग्मा-अल्ड्रिच, कॅटलॉग # P6782) वापरून प्रतिक्रिया उपाय तयार केला गेला. 100 mg/ml Chitin किंवा 2 μM Flg22.या प्रतिक्रिया द्रावणातील 50 μl चारपैकी तीन विहिरींमध्ये जोडले गेले.चौथी विहीर एक मॉक कंट्रोल होती, ज्यामध्ये MAMP वगळता प्रतिक्रिया समाधान जोडले गेले.प्रत्येक ताटात फक्त पाणी असलेल्या चार रिकाम्या विहिरींचा समावेश होता.
प्रतिक्रिया सोल्यूशन जोडल्यानंतर, 1 तासासाठी दर 2 मिनिटांनी SynergyTM 2 मल्टी-डिटेक्शन मायक्रोप्लेट रीडर (बायोटेक) वापरून ल्युमिनेसेन्स मोजले गेले.प्लेट रीडर या 1 तासादरम्यान दर 2 मिनिटांनी ल्युमिनेसेन्स मोजमाप घेतो.प्रत्येक विहिरीचे मूल्य देण्यासाठी सर्व 31 वाचनांची बेरीज मोजली गेली.प्रत्येक जीनोटाइपसाठी MAMP प्रतिसादाचे अंदाजे मूल्य (तीन प्रायोगिक विहिरींचे सरासरी ल्युमिनेसेन्स मूल्य—मॉक वेल मूल्य) -सरासरी रिक्त विहीर मूल्य वजा केले गेले.रिक्त विहिरींची मूल्ये सातत्याने शून्याच्या जवळ होती.
च्या लीफ डिस्क्सनिकोटियाना बेन्थामियाना, एक उच्च प्रतिसाद ज्वारीची ओळ (SC0003), आणि एक कमी प्रतिसाद देणारी ज्वारीची ओळ (PI 6069) देखील गुणवत्तेच्या नियंत्रणाच्या उद्देशाने प्रत्येक 96-वेल प्लेटमध्ये नियंत्रणे म्हणून समाविष्ट केली होती.
B. कुकीइनोकुलम तयार करणे आणि टोचणे
B. कुकीपूर्वी वर्णन केल्याप्रमाणे inoculum तयार केले होते.थोडक्यात, ज्वारीचे दाणे तीन दिवस पाण्यात भिजवून, धुवून, 1L शंकूच्या आकाराच्या फ्लास्कमध्ये स्कूप केले आणि 15psi आणि 121 °C तापमानावर एक तासासाठी ऑटोक्लेव्ह केले.त्यानंतर धान्यावर ताज्या संस्कृतीतून सुमारे 5 मिली मॅसेरेटेड मायसेलियाचे लसीकरण करण्यात आले.B. कुकीLSLP18 विलग करून 2 आठवडे खोलीच्या तपमानावर सोडले जाते, दर 3 दिवसांनी फ्लास्क हलवून.2 आठवड्यांनंतर, बुरशीने प्रादुर्भाव केलेल्या ज्वारीचे दाणे हवेत वाळवले जातात आणि नंतर ते 4 डिग्री सेल्सियस तापमानावर शेतात टोचणी होईपर्यंत साठवले जातात.संपूर्ण चाचणीसाठी समान इनोकुलम वापरला गेला आणि दरवर्षी नवीन बनविला गेला.लसीकरणासाठी, 4-5 आठवडे जुन्या ज्वारीच्या रोपांच्या भोवर्‍यात 6-10 प्रादुर्भावित दाणे टाकण्यात आले.या बुरशीपासून तयार झालेल्या बीजाणूंमुळे ज्वारीच्या कोवळ्या रोपांमध्ये आठवडाभरात संसर्ग होऊ लागला.
बियाणे तयार करणे
शेतात पेरणीपूर्वी ज्वारीच्या बियाण्यावर बुरशीनाशक, कीटकनाशक आणि ~ 1% Spirato 480 FS बुरशीनाशक, 4% Sebring 480 FS बुरशीनाशक, 3% Sorpro 940 ES बियाणे सेफनर असलेल्या मिश्रणाची प्रक्रिया केली जाते.नंतर बियाणे 3 दिवस हवेत वाळवले गेले ज्यामुळे बियाभोवती या मिश्रणाचा पातळ थर तयार झाला.सेफनरने तणनाशक ड्युअल मॅग्नमचा उदयपूर्व उपचार म्हणून वापर करण्यास परवानगी दिली.
टार्गेट लीफ स्पॉट रेझिस्टन्सचे मूल्यांकन
14-15 जून 2017 आणि जून 20, 2018 रोजी क्लेटन, NC येथील सेंट्रल क्रॉप्स रिसर्च स्टेशनमध्ये SCP ची लागवड प्रत्येक केसमध्ये दोन प्रायोगिक प्रतिकृतींसह यादृच्छिक पूर्ण ब्लॉक डिझाइनमध्ये करण्यात आली.प्रति प्लॉट 10 बिया वापरून 0.9 मीटर पंक्ती रुंदीसह 1.8 मीटर एकल ओळीत प्रयोग केले गेले.कडा प्रभाव टाळण्यासाठी प्रत्येक प्रयोगाच्या परिघाभोवती दोन सीमा ओळी लावल्या गेल्या.प्रयोग 20 जुलै 2017 आणि 20 जुलै 2018 रोजी ज्वारीची रोपे वाढीच्या 3 टप्प्यावर होती तेव्हा ज्वारीची रोपे लावण्यात आली होती. रेटिंग एक ते नऊ स्केलवर घेण्यात आले होते, जिथे रोगाची कोणतीही चिन्हे नसलेल्या झाडांना नऊ आणि पूर्णत: गुण दिले गेले. मृत झाडे एक म्हणून गणली गेली.2017 मध्ये दोन रेटिंग आणि 2018 मध्ये चार रीडिंग प्रत्येक वर्षी टोचल्यानंतर दोन आठवड्यांपासून सुरू होते.sAUDPC (रोग प्रगती वक्र अंतर्गत प्रमाणित क्षेत्र) पूर्वी वर्णन केल्याप्रमाणे मोजले गेले.
पोस्ट वेळ: एप्रिल-०१-२०२१