व्यावसायिक सायपरमेथ्रिन औषधांची लहान जलीय बेडूक पिल्लांवरील मृत्यूदर आणि विषारीपणा

या अभ्यासात व्यावसायिक औषधांची प्राणघातकता, अर्ध-प्राणघातकता आणि विषारीपणा यांचे मूल्यांकन करण्यात आले.सायपरमेथ्रिनअनुरन बेडूक-पिल्लांवर (tadpoles) विविध फॉर्म्युलेशन्सची चाचणी घेण्यात आली. तीव्र चाचणीमध्ये, ९६ तासांसाठी १००–८०० μg/L या सांद्रतांची चाचणी घेण्यात आली. दीर्घकालीन चाचणीमध्ये, नैसर्गिकरित्या आढळणाऱ्या सायपरमेथ्रिनच्या सांद्रता (१, ३, ६, आणि २० μg/L) मृत्यूदरासाठी तपासण्यात आल्या, त्यानंतर ७ दिवसांसाठी मायक्रोन्यूक्लियस चाचणी आणि लाल रक्तपेशींमधील केंद्रकीय विकृतींची तपासणी करण्यात आली. बेडूक-पिल्लांसाठी व्यावसायिक सायपरमेथ्रिन फॉर्म्युलेशनची LC50 सांद्रता २७३.४१ μg L−1 होती. दीर्घकालीन चाचणीमध्ये, सर्वाधिक सांद्रतेमुळे (२० μg L−1) ५०% पेक्षा जास्त मृत्यूदर दिसून आला, कारण त्यामुळे चाचणी केलेल्या अर्ध्या बेडूक-पिल्लांचा मृत्यू झाला. मायक्रोन्यूक्लियस चाचणीमध्ये ६ आणि २० μg L−1 या सांद्रतांवर लक्षणीय परिणाम दिसून आले आणि अनेक केंद्रकीय विकृती आढळल्या, ज्यामुळे असे सूचित होते की व्यावसायिक सायपरमेथ्रिन फॉर्म्युलेशनमध्ये पी. ग्रॅसिलिस (P. gracilis) विरुद्ध जनुकीय विषारी क्षमता (genotoxic potential) आहे. सायपरमेथ्रिन या प्रजातीसाठी अत्यंत धोकादायक आहे, जे दर्शवते की ते अल्प आणि दीर्घ कालावधीत अनेक समस्या निर्माण करू शकते आणि या परिसंस्थेच्या गतिशीलतेवर परिणाम करू शकते. त्यामुळे, असा निष्कर्ष काढता येतो की व्यावसायिक सायपरमेथ्रिन फॉर्म्युलेशन्सचा पी. ग्रॅसिलिसवर विषारी परिणाम होतो.
कृषी कार्यांच्या सततच्या विस्तारामुळे आणि सघन वापरामुळेकीटक नियंत्रणउपाययोजनांमुळे, जलचर प्राणी वारंवार कीटकनाशकांच्या संपर्कात येतात¹,². शेती क्षेत्राजवळील जलस्रोतांच्या प्रदूषणामुळे उभयचरांसारख्या अवांछित जीवांच्या विकासावर आणि जगण्यावर परिणाम होऊ शकतो.
पर्यावरणीय घटकांच्या मूल्यांकनामध्ये उभयचरांचे महत्त्व वाढत आहे. अनुरन्सना (बेडूक) पर्यावरणीय प्रदूषकांचे चांगले जैवसूचक मानले जाते, कारण त्यांच्यामध्ये जटिल जीवनचक्र, अळ्यांच्या वाढीचा वेगवान दर, पोषण स्थिती, पारगम्य त्वचा¹⁰,¹¹, प्रजननासाठी पाण्यावरील अवलंबित्व¹² आणि असुरक्षित अंडी¹¹,¹³,¹⁴ यांसारखी अद्वितीय वैशिष्ट्ये आहेत. छोटा पाणबेडूक (फिसालेमस ग्रॅसिलिस), जो सामान्यतः रडणारा बेडूक म्हणून ओळखला जातो, तो कीटकनाशक प्रदूषणाचा एक जैवसूचक प्रजाती असल्याचे सिद्ध झाले आहे⁴,⁵,⁶,⁷,¹⁵. ही प्रजाती अर्जेंटिना, उरुग्वे, पॅराग्वे आणि ब्राझीलमधील स्थिर पाण्यात, संरक्षित क्षेत्रांमध्ये किंवा विविध अधिवास असलेल्या क्षेत्रांमध्ये आढळते¹⁶¹⁷ आणि तिच्या विस्तृत वितरणामुळे व विविध अधिवासांना सहन करण्याच्या क्षमतेमुळे आययूसीएन (IUCN) वर्गीकरणानुसार स्थिर मानली जाते¹⁸.
सायपरमेथ्रिनच्या संपर्कात आल्यानंतर उभयचरांमध्ये उपघातक परिणाम नोंदवले गेले आहेत, ज्यात बेडूक-पिल्लांमधील वर्तणुकीतील, आकारशास्त्रीय आणि जैवरासायनिक बदल२३,२४,२५, मृत्यूदर आणि रूपांतरणाच्या वेळेत बदल, एन्झाइमॅटिक बदल, अंड्यातून बाहेर पडण्याच्या यशात घट२४,२५, अतिसक्रियता२६, कोलिनेस्टेरेज क्रियेवर प्रतिबंध२७ आणि पोहण्याच्या क्षमतेत बदल७,२८ यांचा समावेश आहे. तथापि, उभयचरांमध्ये सायपरमेथ्रिनच्या जनुकीय विषारी परिणामांवरील अभ्यास मर्यादित आहेत. म्हणून, अनुरन प्रजातींची सायपरमेथ्रिनला असलेली संवेदनशीलता तपासणे महत्त्वाचे आहे.
पर्यावरणातील प्रदूषणामुळे उभयचरांच्या सामान्य वाढ आणि विकासावर परिणाम होतो, परंतु कीटकनाशकांच्या संपर्कामुळे डीएनएला होणारे अनुवांशिक नुकसान हा सर्वात गंभीर दुष्परिणाम आहे¹³. रक्तपेशींच्या आकारविज्ञानाचे विश्लेषण हे प्रदूषण आणि वन्य प्रजातींसाठी पदार्थाच्या संभाव्य विषारीपणाचे एक महत्त्वाचे जैवसूचक आहे²⁹. पर्यावरणातील रसायनांची जनुकीय विषारीता निश्चित करण्यासाठी मायक्रोन्यूक्लियस चाचणी ही सर्वात सामान्यपणे वापरल्या जाणाऱ्या पद्धतींपैकी एक आहे³⁰. ही एक जलद, प्रभावी आणि स्वस्त पद्धत आहे जी उभयचरांसारख्या जीवांच्या रासायनिक प्रदूषणाचे एक चांगले सूचक आहे³¹,³² आणि जनुकीय विषारी प्रदूषकांच्या संपर्काविषयी माहिती देऊ शकते³³.
मायक्रोन्यूक्लियस चाचणी आणि पर्यावरणीय जोखीम मूल्यांकनाचा वापर करून लहान जलीय बेडूक पिल्लांसाठी व्यावसायिक सायपरमेथ्रिन फॉर्म्युलेशन्सच्या विषारी क्षमतेचे मूल्यांकन करणे हा या अभ्यासाचा उद्देश होता.
चाचणीच्या तीव्र कालावधीत व्यावसायिक सायपरमेथ्रिनच्या वेगवेगळ्या सांद्रतेच्या संपर्कात आलेल्या पी. ग्रॅसिलिस बेडूक पिल्लांची संचयी मृत्यूदर (%).
दीर्घकालीन चाचणी दरम्यान व्यावसायिक सायपरमेथ्रिनच्या वेगवेगळ्या सांद्रतेच्या संपर्कात आलेल्या पी. ग्रॅसिलिस बेडूक पिल्लांची संचयी मृत्यूदर (%).
सायपरमेथ्रिनच्या वेगवेगळ्या सांद्रतांच्या (६ आणि २० μg/L) संपर्कात आलेल्या उभयचरांमध्ये दिसून आलेला उच्च मृत्यूदर हा जनुकीय विषारी परिणामांचा परिणाम होता, जो तांबड्या रक्तपेशींमध्ये (एरिथ्रोसाइट्स) सूक्ष्म केंद्रके (MN) आणि केंद्रकीय विकृतींच्या उपस्थितीवरून सिद्ध झाला. सूक्ष्म केंद्रकांची निर्मिती ही सूत्री विभाजनातील (मायटोसिस) त्रुटी दर्शवते आणि ती गुणसूत्रांचे सूक्ष्मनलिकेशी (मायक्रोट्यूब्यूल्स) कमकुवत बंधन, गुणसूत्र ग्रहण आणि वहनासाठी जबाबदार असलेल्या प्रथिन संकुलांमधील दोष, गुणसूत्र विभाजनातील त्रुटी आणि डीएनए नुकसान दुरुस्तीतील त्रुटी यांच्याशी संबंधित आहे38,39 आणि कीटकनाशकांमुळे होणाऱ्या ऑक्सिडेटिव्ह ताणाशी संबंधित असू शकते40,41. तपासलेल्या सर्व सांद्रतांवर इतर विकृती देखील दिसून आल्या. सायपरमेथ्रिनच्या वाढत्या सांद्रतेमुळे तांबड्या रक्तपेशींमधील केंद्रकीय विकृतींमध्ये सर्वात कमी (१ μg/L) आणि सर्वात जास्त (२० μg/L) मात्रेवर अनुक्रमे ५% आणि २०% वाढ झाली. उदाहरणार्थ, एखाद्या प्रजातीच्या डीएनए मधील बदलांचे अल्पकालीन आणि दीर्घकालीन अस्तित्वावर गंभीर परिणाम होऊ शकतात, ज्यामुळे लोकसंख्या घट, प्रजनन क्षमतेत बदल, आंतरप्रजनन, अनुवांशिक विविधतेचा ऱ्हास आणि स्थलांतराच्या दरात बदल होतो. हे सर्व घटक प्रजातींचे अस्तित्व आणि देखभाल यावर परिणाम करू शकतात४२,४३. एरिथ्रॉइड विकृतींची निर्मिती सायटोकायनेसिसमधील अडथळ्याचे संकेत देऊ शकते, ज्यामुळे असामान्य पेशी विभाजन होते (द्विकेंद्रकी तांबड्या रक्तपेशी)४४,४५; बहुखंडी केंद्रके म्हणजे केंद्रकीय पटलाचे अनेक खंड असलेले उंचवटे असतात४६, तर इतर एरिथ्रॉइड विकृती डीएनए प्रवर्धनाशी संबंधित असू शकतात, जसे की केंद्रकीय मूत्रपिंड/ब्लेब्स४७. केंद्रकहीन तांबड्या रक्तपेशींची उपस्थिती ऑक्सिजन वहनात अडथळा दर्शवू शकते, विशेषतः दूषित पाण्यात४८,४९. ॲपोप्टोसिस पेशी मृत्यू दर्शवतो५०.
इतर अभ्यासांनी देखील सायपरमेथ्रिनचे जनुकीय विषारी परिणाम दर्शवले आहेत. कबाना आणि सहकाऱ्यांनी ५१, ओडोंटोफ्रायनस अमेरिकानस पेशींना सायपरमेथ्रिनच्या उच्च सांद्रतेमध्ये (५००० आणि १०,००० μg L−1) ९६ तास ठेवल्यानंतर, त्यांच्यामध्ये सूक्ष्म केंद्रके (मायक्रोन्यूक्लिआय) आणि द्विकेंद्रकी पेशी व ॲपोप्टोटिक पेशींसारखे केंद्रकीय बदल दिसून आले. सायपरमेथ्रिन-प्रेरित ॲपोप्टोसिस पी. बिलिगोनिगेरस ५२ आणि रायनेला अरेनरम ५३ मध्ये देखील आढळून आले. हे परिणाम सूचित करतात की सायपरमेथ्रिनचे विविध जलजीवांवर जनुकीय विषारी परिणाम होतात आणि एमएन (MN) व ईएनए (ENA) चाचणी उभयचरांवरील उपघातक परिणामांचे सूचक असू शकते, तसेच विषारी पदार्थांच्या संपर्कात आलेल्या स्थानिक प्रजाती आणि वन्य जीवांच्या समूहांना लागू होऊ शकते१२.
सायपरमेथ्रिनची व्यावसायिक उत्पादने (अक्यूट आणि क्रॉनिक दोन्ही) पर्यावरणासाठी मोठा धोका निर्माण करतात, ज्यांची HQs (घातक एकाग्रता) यूएस एन्व्हायर्नमेंटल प्रोटेक्शन एजन्सी (EPA) च्या पातळी54 पेक्षा जास्त आहे, ज्यामुळे पर्यावरणात उपस्थित असल्यास प्रजातींवर प्रतिकूल परिणाम होऊ शकतो. क्रॉनिक जोखीम मूल्यांकनामध्ये, मृत्यूसाठी NOEC 3 μg L−1 होता, ज्यामुळे पाण्यात आढळणारी सांद्रता प्रजातींसाठी धोकादायक असू शकते याची पुष्टी होते55. एंडोसल्फान आणि सायपरमेथ्रिनच्या मिश्रणाच्या संपर्कात आलेल्या R. arenarum च्या अळ्यांसाठी 168 तासांनंतर प्राणघातक NOEC 500 μg L−1 होता; हे मूल्य 336 तासांनंतर 0.0005 μg L−1 पर्यंत कमी झाले. लेखकांनी दाखवले आहे की, संपर्क जितका जास्त काळ टिकतो, तितकी प्रजातींसाठी हानिकारक सांद्रता कमी होते. हे देखील अधोरेखित करणे महत्त्वाचे आहे की, त्याच संपर्काच्या वेळेत P. gracilis च्या तुलनेत NOEC मूल्ये जास्त होती, जे दर्शवते की सायपरमेथ्रिनला प्रजातींचा प्रतिसाद प्रजाती-विशिष्ट आहे. शिवाय, मृत्यूदराच्या बाबतीत, सायपरमेथ्रिनच्या संपर्कात आल्यानंतर पी. ग्रॅसिलिसचे CHQ मूल्य 64.67 पर्यंत पोहोचले, जे यूएस एन्व्हायर्नमेंटल प्रोटेक्शन एजन्सीने निर्धारित केलेल्या संदर्भ मूल्यापेक्षा जास्त आहे54, आणि आर. अरेनरमच्या अळ्यांचे CHQ मूल्य देखील या मूल्यापेक्षा जास्त होते (336 तासांनंतर CHQ > 388.00), जे दर्शवते की अभ्यासलेली कीटकनाशके अनेक उभयचर प्रजातींसाठी उच्च धोका निर्माण करतात. पी. ग्रॅसिलिसला कायापालट पूर्ण करण्यासाठी अंदाजे 30 दिवस लागतात56 हे लक्षात घेता, असा निष्कर्ष काढता येतो की सायपरमेथ्रिनच्या अभ्यासलेल्या सांद्रता संक्रमित जीवांना लहान वयात प्रौढ किंवा पुनरुत्पादक अवस्थेत प्रवेश करण्यापासून रोखून लोकसंख्या घटण्यास हातभार लावू शकतात.
मायक्रोन्यूक्लिआय आणि इतर एरिथ्रोसाइट न्यूक्लियर विकृतींच्या गणन केलेल्या जोखीम मूल्यांकनामध्ये, CHQ मूल्ये 14.92 ते 97.00 पर्यंत होती, जे दर्शवते की सायपरमेथ्रिनमध्ये पी. ग्रॅसिलिससाठी त्याच्या नैसर्गिक अधिवासातही संभाव्य जनुकीय विषारी धोका होता. मृत्यूदर विचारात घेतल्यास, पी. ग्रॅसिलिसला सहन करता येणारी झेनोबायोटिक संयुगांची कमाल सांद्रता 4.24 μg L−1 होती. तथापि, 1 μg/L इतक्या कमी सांद्रतेने देखील जनुकीय विषारी परिणाम दर्शवले. या वस्तुस्थितीमुळे विकृत व्यक्तींच्या संख्येत वाढ होऊ शकते57 आणि त्यांच्या अधिवासातील प्रजातींच्या विकासावर आणि प्रजननावर परिणाम होऊ शकतो, ज्यामुळे उभयचर प्राण्यांच्या लोकसंख्येत घट होऊ शकते.
सायपरमेथ्रिन या कीटकनाशकाच्या व्यावसायिक फॉर्म्युलेशन्सनी पी. ग्रॅसिलिसमध्ये उच्च तीव्र आणि दीर्घकालीन विषारीपणा दर्शवला. सूक्ष्म केंद्रके (मायक्रोन्यूक्लिआय) आणि तांबड्या रक्तपेशींच्या केंद्रकीय विकृती, विशेषतः दातेरी केंद्रके (सेरेटेड न्यूक्लिआय), खंडित केंद्रके (लोब्ड न्यूक्लिआय) आणि पुटिकांसारख्या (वेसिक्युलर) केंद्रकांच्या उपस्थितीवरून दिसून येते की, विषारी परिणामांमुळे मृत्यूचे प्रमाण जास्त होते. याव्यतिरिक्त, अभ्यासलेल्या प्रजातींमध्ये तीव्र आणि दीर्घकालीन असे दोन्ही प्रकारचे पर्यावरणीय धोके वाढलेले दिसून आले. आमच्या संशोधन गटाने केलेल्या पूर्वीच्या अभ्यासांसोबतच या माहितीवरून असे दिसून आले की, सायपरमेथ्रिनच्या वेगवेगळ्या व्यावसायिक फॉर्म्युलेशन्समुळे देखील पी. ग्रॅसिलिसमध्ये ॲसिटिलकोलिनस्टेरेज (AChE) आणि ब्युटिरिलकोलिनस्टेरेज (BChE) ची क्रियाशीलता कमी झाली आणि ऑक्सिडेटिव्ह ताण निर्माण झाला⁵⁸, तसेच पोहण्याच्या क्रियेत बदल आणि तोंडाची विकृती⁵⁹ दिसून आली. यावरून असे सूचित होते की, सायपरमेथ्रिनच्या व्यावसायिक फॉर्म्युलेशन्समध्ये या प्रजातीसाठी उच्च प्राणघातक आणि उप-प्राणघातक विषारीपणा आहे. हार्टमन इत्यादी. ६० व्या अभ्यासात असे आढळून आले की, इतर नऊ कीटकनाशकांच्या तुलनेत सायपरमेथ्रिनची व्यावसायिक सूत्रे पी. ग्रॅसिलिस आणि त्याच प्रजातीच्या दुसऱ्या प्रजातीसाठी (पी. कुविएरी) सर्वात विषारी होती. यावरून असे सूचित होते की, पर्यावरण संरक्षणासाठी सायपरमेथ्रिनच्या कायदेशीररित्या मंजूर केलेल्या सांद्रतेमुळे उच्च मृत्यूदर आणि दीर्घकालीन लोकसंख्या घट होऊ शकते.
उभयचरांवरील कीटकनाशकाच्या विषारीपणाचे मूल्यांकन करण्यासाठी पुढील अभ्यासाची आवश्यकता आहे, कारण पर्यावरणात आढळणारी त्याची सांद्रता उच्च मृत्यूदरास कारणीभूत ठरू शकते आणि पी. ग्रॅसिलिससाठी संभाव्य धोका निर्माण करू शकते. उभयचर प्रजातींवरील संशोधनास प्रोत्साहन दिले पाहिजे, कारण या जीवांबद्दलची माहिती, विशेषतः ब्राझीलमधील प्रजातींबद्दलची माहिती दुर्मिळ आहे.
स्थिर परिस्थितीत दीर्घकालीन विषारी चाचणी १६८ तास (७ दिवस) चालली आणि उपघातक सांद्रता १, ३, ६ आणि २० μg ai L−1 होत्या. दोन्ही प्रयोगांमध्ये, प्रत्येक उपचार गटातील १० बेडूक-पिल्लांचे सहा पुनरावृत्तींसह मूल्यांकन केले गेले, म्हणजेच प्रत्येक सांद्रतेसाठी एकूण ६० बेडूक-पिल्ले होती. दरम्यान, केवळ पाण्याचा उपचार नकारात्मक नियंत्रण म्हणून वापरला गेला. प्रत्येक प्रायोगिक मांडणीमध्ये ५०० मिली क्षमतेची आणि ५० मिली द्रावणात १ बेडूक-पिल्लू या घनतेची एक निर्जंतुक काचेची डिश होती. बाष्पीभवन टाळण्यासाठी फ्लास्क पॉलिथिलीन फिल्मने झाकलेला होता आणि त्यात सतत हवा खेळवली जात होती.
०, ९६ आणि १६८ तासांनी कीटकनाशकांची सांद्रता निश्चित करण्यासाठी पाण्याचे रासायनिक विश्लेषण करण्यात आले. सबिन एट अल. ६८ आणि मार्टिन्स एट अल. ६९ यांच्या मते, हे विश्लेषण सांता मारियाच्या फेडरल युनिव्हर्सिटीच्या कीटकनाशक विश्लेषण प्रयोगशाळेत (LARP) गॅस क्रोमॅटोग्राफी आणि ट्रिपल क्वॉड्रुपोल मास स्पेक्ट्रोमेट्री (व्हेरिअन मॉडेल १२००, पालो अल्टो, कॅलिफोर्निया, यूएसए) यांच्या संयोगाने करण्यात आले. पाण्यातील कीटकनाशकांचे परिमाणात्मक निर्धारण पूरक सामग्रीमध्ये (तक्ता SM1) दर्शविले आहे.
मायक्रोन्यूक्लियस चाचणी (MNT) आणि लाल रक्तपेशी केंद्रकीय विकृती चाचणी (RNA) साठी, प्रत्येक उपचार गटातील १५ बेडूक-पिल्लांचे विश्लेषण करण्यात आले. बेडूक-पिल्लांना ५% लिडोकेन (५० मिग्रॅ/ग्रॅम-१७०) देऊन भूल देण्यात आली आणि डिस्पोजेबल हेपॅरिनाइज्ड सिरिंज वापरून कार्डियाक पंक्चरद्वारे रक्ताचे नमुने गोळा करण्यात आले. निर्जंतुक मायक्रोस्कोप स्लाईड्सवर रक्ताचे स्मीअर्स तयार करण्यात आले, हवेत वाळवण्यात आले, १००% मिथेनॉल (४°C) मध्ये २ मिनिटांसाठी स्थिर करण्यात आले आणि नंतर अंधारात १५ मिनिटांसाठी १०% गिम्सा द्रावणाने रंगवण्यात आले. प्रक्रियेच्या शेवटी, अतिरिक्त रंग काढून टाकण्यासाठी स्लाईड्स डिस्टिल्ड वॉटरने धुतल्या गेल्या आणि खोलीच्या तापमानावर वाळवण्यात आल्या.
MN आणि ENA ची उपस्थिती निश्चित करण्यासाठी प्रत्येक बेडूक-पिल्लामधील किमान १००० RBC चे विश्लेषण ७१ ऑब्जेक्टिव्ह असलेल्या १००× मायक्रोस्कोपचा वापर करून करण्यात आले. सायपरमेथ्रिनच्या सांद्रता आणि नियंत्रणे विचारात घेऊन बेडूक-पिल्लांमधील एकूण ७५,७९६ RBC चे मूल्यांकन करण्यात आले. कॅरास्को आणि फेनेच यांच्या पद्धतीनुसार38,72 जनुकीय विषारीपणाचे विश्लेषण खालील केंद्रकीय विकृतींची वारंवारता निश्चित करून करण्यात आले: (१) केंद्रकहीन पेशी: केंद्रक नसलेल्या पेशी; (२) ॲपोप्टोटिक पेशी: केंद्रकाचे विखंडन, नियोजित पेशी मृत्यू; (३) द्विकेंद्रकीय पेशी: दोन केंद्रके असलेल्या पेशी; (४) केंद्रकीय कळ्या किंवा ब्ल्ब पेशी: केंद्रकीय पटलाचे लहान उंचवटे असलेल्या पेशी, सूक्ष्मकेंद्रकांच्या आकाराचे ब्ल्ब; (५) कॅरिओलायझ्ड पेशी: अंतर्गत पदार्थाशिवाय केवळ केंद्रकाची बाह्यरेखा असलेल्या पेशी; (6) खाचयुक्त पेशी: ज्यांच्या केंद्रकांच्या आकारात स्पष्ट भेगा किंवा खाचा असतात अशा पेशी, ज्यांना मूत्रपिंडाच्या आकाराची केंद्रके असेही म्हणतात; (7) खंडित पेशी: ज्यांच्या केंद्रकीय उंचवट्यांचा आकार वर उल्लेखलेल्या पुटिकांपेक्षा मोठा असतो अशा पेशी; आणि (8) सूक्ष्मपेशी: ज्यांची केंद्रके संकुचित आणि पेशीद्रव्य कमी झालेले असते अशा पेशी. या बदलांची तुलना नकारात्मक नियंत्रणाच्या निकालांशी करण्यात आली.
तीव्र विषारी चाचणीच्या निकालांचे (LC50) विश्लेषण GBasic सॉफ्टवेअर आणि TSK-Trimmed स्पीअरमन-कार्बर पद्धत74 वापरून करण्यात आले. दीर्घकालीन चाचणीच्या डेटाची त्रुटी सामान्यता (शॅपिरो-विल्क्स) आणि प्रसरणाची एकरूपता (बार्टलेट) यासाठी पूर्व-चाचणी करण्यात आली. निकालांचे विश्लेषण एक-मार्गी प्रसरण विश्लेषण (ANOVA) वापरून करण्यात आले. डेटाची आपापसात तुलना करण्यासाठी टुकी चाचणीचा वापर करण्यात आला, आणि उपचार गट व नकारात्मक नियंत्रण गट यांच्यातील डेटाची तुलना करण्यासाठी डनेट चाचणीचा वापर करण्यात आला.
LOEC आणि NOEC डेटाचे विश्लेषण डनेटच्या चाचणीचा वापर करून करण्यात आले. सांख्यिकीय चाचण्या Statistica 8.0 सॉफ्टवेअर (StatSoft) वापरून 95% (p < 0.05) च्या सार्थकता पातळीवर करण्यात आल्या.